请教关于脐血CIK细胞增殖团与CD3，CD56双阳性的问题

bloodroses

小弟刚刚接触CIK，养外周血CIK时，增殖团的数量和体积都相应增加，第7天双阳率是10%，第14天到了50%。
, ]1 u7 b( J# I/ T6 j6 F4 o$ f诱导方案是INF-γ 1000u/ml, 24小时后加CD3 50ng/ml, IL-2  300U/ml，之后2~3天半量换液，补充IL-2到300U/ml。
6 h1 p+ g- [7 u' \8 {1 S, A培养基用国产无血清培养基。分离液是Ficoll 1.077。  R" m* E+ T6 L9 b- T6 c" k1 O- d
可是养脐血CIK时，分离方法和诱导方案以及培养基都相同。
6 Q( k; m- ~9 C8 h9 B3 j5 Z第3天的时候，可见少量增殖团生成，到第7天检测时，双阳率在0.5%以下，: S2 W2 c8 f8 T* G" G2 A" d
之后培养基又用PRMI 1640+10%FBS，以及在培养基中加10%自体血浆。
9 c8 U/ M( F8 Y, O" o重复4次试验，都是只见增殖团，流式检测时，双阳率都在1%以下。
0 t4 n' M  a6 v& a& n& f6 }/ Q* |恳请高手帮忙分析一下原因啊，谢谢。

bloodroses

回复 liutianhua 的帖子
6 E- S1 {5 a" @$ v6 r2 n) [0 ~5 e, p
谢谢您的回复

bloodroses

回复 莫邪小仙 的帖子
# [3 ?' O5 h: w7 h, w8 `4 P& s
" N0 m; V& T; t* ~. C; R( g6 o请问脐血CIK诱导方案你用的是什么啊？

bloodroses

回复 莫邪小仙 的帖子5 }4 S7 L  \- V9 q- X

; o- B$ R0 ^) d: F% N. W* j我的没有加IL-1，而且IL-2的浓度也只有300U

bloodroses

回复 lyd20042004 的帖子) H& E5 l) d9 f7 p% C& R

4 e2 J/ l4 `* s9 A: G- C目前的数据只是个例4 k! ?7 g* D" Y8 i
数据还在积累中，平均值是多少，现在还不好说

bloodroses

回复 sunny.yc 的帖子
7 h8 i/ I0 O, n$ Y3 ^) G- r# s
" C+ a6 I# O' W" ^养外周血的时候，是用的国产无血清培养基，没有加血浆或者血清。
6 B6 G$ i6 y$ p, E" l* z. ?/ U养脐血的时候，不加血清，只加10%FBS，或者只加10%自体血浆，都做了单因素考察。可是还是没有双阳的细胞。

bloodroses

回复 kiss2346 的帖子
8 A0 v# m' p& ~( \1 ~
6 H( V: B3 F$ `) d7 O外周血是正常人的血，没有炎症也没有癌症。1 x& b8 a) Q; b* P6 Q& F6 h
请问你用的脐血，采血量是多少啊，血袋是多大容量的，抗凝剂是的成分和量是多少啊？
) {( p) g2 o6 t/ y. \# B! |谢谢。

bloodroses

回复 kiss2346 的帖子
7 i# c3 F7 V7 B) B0 E' ]% }6 Q3 X3 W0 g7 s- z" v
非常感谢您的回复。

bloodroses

回复 gejianyun 的帖子& A" t* {3 @& n. h2 s4 t2 F  F( F# s/ o. m

, s2 M5 t( m& l. s% w换液的时候，我只加了IL-2

bloodroses

回复 wind789 的帖子. n9 ?# [: w. b; Z3 i

" X, L& e: U( ]8 x* d7 \2 T用的是200ml血袋，抗凝剂是枸橼酸钠，采血量大概60~80ml（含28ml抗凝剂），一般室温放置30~60min后开始离心。