脐带组织块贴壁法求助

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谢谢。1）脐带在半小时内开始操作，PBS冲洗3次后，剥离动静脉，撕出白色胶块（时间1-2小时）；2）剪碎（0.5-1小时）成0.5-3mm小块，倒入离心管，PBS 1000rmp，5min洗涤1次，添加1ml 培养液，组织块倒入到FBS包被的培养瓶中，9小时后添加培养液至没过组织块，此时已经有细胞爬出，并且很多组织块都漂浮 ，1天后大量细胞爬出，3天后半量换液，换液后细胞仍在，第5天细胞就基本上消失了，只有完全漂浮组织块及细胞碎片。没有每天动培养瓶，组织块就是贴壁不紧。

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组织块贴壁法培养皿要铺多聚不？用玻璃的还是塑料的？
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回复 老姜 的帖子8 j4 C  Y! s% k  o  V$ [- j

9 o3 h7 D9 U, w( F# b0 {谢谢，换液前不敢动了。但是第一次组织块添加液体前就飘了好多。

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2 J9 z4 S3 Z6 o; B! P% a1 h5 x7 D谢谢，我确实发现以前没有洗涤的组织块贴壁牢些，我有一次细胞传代了，结果传代后细胞就一蹶不振了了，你也用0.25%的胰酶消化传代吗？我也看很多人用0.05%或0.125%胰酶消化，1:2传代？

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回复 spring1221 的帖子) V1 k) z% Y# l7 L2 R* F2 o: p

6 L# K! }% a$ X* _9 I3 s谢谢指点。

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总结了一下各位前辈的回复，我想可能贴壁不牢主要在于，组织块刚接种时，组织块太湿；第一次添加液体时液体时枪头的冲力比较大，细胞容易在添加培养液时被冲下来。所以，打算改进这两点。

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回复 漂泊的风 的帖子7 n: A5 a; u# i5 ]
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哦，谢谢。

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回复 spring1221 的帖子
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好的，谢谢。