脐带组织块贴壁法求助

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将脐带表面迅速用生理盐水冲洗三遍，冲洗干净表面血液。
2 e2 u8 ~9 `( V% P, x: U剪成2-4cm小段，放在生理盐水里，撕开或剪开动脉附近脐带，抽离2条整根动脉，剪开静脉，撕掉静脉壁；将华氏胶撕出来，小剪刀剪碎，再用眼科剪剪成0.5-2mm3。: r6 L& U2 a/ j$ b' E' H9 z
4、贴壁：用15%FBS的培养基将T25培养瓶湿润一下，用注射器针头挑取小组织块从瓶底向瓶口铺好；5 x! O  q7 |6 V
5、添培养液：4h后用巴士管吸取培养液，小心滴到组织块上及组织块周围，以刚刚能没了组织块为宜。6 v9 M" v/ ~3 O- V8 V% x8 `" {  m5 `
以上是我的组织块贴壁法，请教：
3 O3 N0 `+ P4 O: ^, g  J; t①组织块很难剪成1mm3，剪了大半个小时还是有2mm3左右大小，怎么办？
1 g: K* W  V" c* O: h/ i; p5 N" |②组织块贴壁时，组织块之间应该留有一定间隙还是聚集在一块儿?
& |8 t! A3 U6 C, C③抽离动脉后，发现胶的颜色有点发黄，有没有找错胶。或者是剥离血管时间花了太久，用了将近3个小时。0 U+ Q: a5 o7 B: H7 R) i% u( ?' B3 V
剪碎后要不要PBS洗涤，还是直接贴壁好？
+ s6 H+ M8 H# J$ P& F3 ~: @用碧云天的多聚赖氨酸铺瓶后立即PBS洗涤2遍，这样会不会影响贴壁效果？还是要铺5min,
) F" P& S1 Y9 T: }% q以上方案，第二次剥脐带，有什么不妥，请各位指教。

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3 U. M; y$ Q! h: g& D$ G回复 老姜 的帖子' g0 Z0 z+ r7 Q" [: g; ]

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这是我今天拍的，是不是贴壁太紧密了？好像没看到啥细胞。' a, W3 f% b2 X+ H: d! Q
需要倒置贴壁吗？把底面朝上4h再倒转回来，添加培养液。
+ T0 K# q% t9 o离心洗涤的时候1000rmp，转速可以不？

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回复 ruofan1982 的帖子
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需要倒置贴壁吗？

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  Q  u5 f' A6 R; ~- \8 |) Z, C回复 dongxin 的帖子5 l2 u. L2 r" ?! \1 `
5 \$ s( n5 k- N; \0 e# `( T1 t& `
谢谢，你的组织块剪完后要不要进行离心洗涤或者PBS清洗？以前的帖子都说要倒置贴壁吗，你培养倒置贴壁不？

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回复 lazyworm 的帖子
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好的，以后选择弯剪刀试试。

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回复 猩猩 的帖子8 v2 M, e1 |) d7 |' T- ]; q
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好的，以后直接剥离静脉看看。尽量减少污染。

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回复 老姜 的帖子
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谢谢指点，这是接种第5天我拍摄的照片，上面的是间充质不。这种情况下可以换液了不？

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多谢大家的指点，我一定继续努力。

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回复 jxydiandian 的帖子
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谢谢，我尽量加快速度。

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回复 孙帅帅 的帖子
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8 h5 k8 E& k5 n: R我也试试加点血清看看贴壁效果会不会更好。