脐带间充质冻存

湖南干细胞

养了批脐带间充质，打算冻存。请教那一代冻存好？是换液的时候冻存还是什么时候冻存？冻存液用哪个最好?20%FBS+10%DMSO+70%D/F12如何？请大家指教。谢谢。

wind789

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, P7 y: l$ H1 o* I3 u5 k$ K, X* r- u* b7 {" P7 c" d
过年都没有休息，精神值得学习啊！！
, G+ N2 \* @2 u2 b. [& \# k) ^我觉得你的配方应该可以哈。我有时用10%血清，有时无血清。

deshenglll

这要根据你的具体情况而定（复苏后是继续培养还是直接发放）。要是为节约成本肯定是代次越低越好了。

湖南干细胞

回复 deshenglll 的帖子. t# f. x3 H2 L. }0 R$ l# _  X

2 l1 [% O; h" w- D  p: }7 x要继续培养的。就怕传代久了复苏的活不了。

湖南干细胞

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5 `. c' n# n1 t+ \
" ~+ s9 J" C+ m; `谢谢。无奈。我的细胞又污染了，之前实验室分装的血清有白色沉淀物质，不知道怎么回事。

xiaolong

你这个配方我没试过，凭经验应该可以，你可以试试看

漂泊的风

你这个配方我觉得血清的浓度低了，我们冻存血清的浓度至少要是50%，浓度低了会损伤细胞的.
% j( Q+ q. w- b: }( Y8 F3 C' T

yuheng

我们用血清90%+10%DMSO的配方，但是比较浪费血清。LZ的方法也是一种标配，冻存细胞没有任何问题。; U/ o/ [- Y1 L7 D1 r& }+ f: H# ^' E
冻存细胞的时机一般是细胞活力最好的时候，也就是长到80%融合的时候。

暖羊羊

冻存肯定是代次越低越好，因为传代多了容易分化，细胞长到80%-90%并且状态良好就可以冻存了。我们冻存的时候没用培养基，直接是90%血清+10%DMSO，冻存液的配方有很多，楼主可以尝试一下。

湖南干细胞

回复 暖羊羊 的帖子' i# V) h- T$ J2 h# j! H

, c! n" ^! z! E- O谢谢。那细胞复苏的时候水浴用自来水还是要用去离子水？溶解完要用酒精擦冻存管不。离心时应该加入4℃的培养基稀释后离心，还是用预热至37℃的培养基稀释？