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转基因小鼠制备实验方法 [复制链接]

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楼主
发表于 2013-2-18 01:19 |只看该作者 |正序浏览 |打印
1、 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。
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1 X0 u4 @6 x* @% I, n    2、 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。7 o5 y$ E* @& L

+ d- c* C) [5 L; J7 u5 H4 d! P    3、第二天上午9:00前观察供体、受体,有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。
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' w. k! M6 D/ N4 i    4、10:30左右,断颈处死供体,手术取出整个输卵管,放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。显微镜下,用镊子撕开输卵管壶腹部,受精卵随同颗粒细胞即一同流出。0 t+ s2 J8 \; t/ q' y' G( l, Y9 N
4 a& r. U: ^; P4 A+ q( T
    5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵,当受精卵周围的颗粒细胞脱离时,将受精卵吸出,放入M2液中洗涤,最后放在M16液中放入5% CO2,37C0培养箱培养。
' h! b& B& w# R0 @
8 C( h! p2 n0 P6 Z) Z+ a# t    6、在显微镜下观察,挑选细胞饱满,透明带清晰,雄原核清晰可见的受精卵待用。
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0 v( h& f; e" K) N4 K8 p* T% o    7、安装持卵针和注射针,使其末端平行于载物台,在凹玻片的中央滴入一滴M2液,覆盖石蜡油,移入待注射的受精卵。DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。2 S$ q: W. t* ~& g9 S: v9 m5 b
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    8、在高倍镜下,将注射针轻触持卵管,使DNA缓慢流出并控制其流量;反复吹吸受精卵,使其处于最佳位置,将注射针刺入受精卵的雄原核,直至看到原核膨大即退出。将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置,不致于混搅,注射完毕后,放入5% CO2,37C0培养箱培养。
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    9、将受体麻醉,注射计量为1%戊巴比妥钠0.01ml/g,腹腔注射。手术取出卵巢连接输卵管,用脂肪镊固定,在显微镜下找到输卵管开口。吸取注射后经培养成活的受精卵,吸取方法是先吸一段较长的M2,吸一个气泡,然后吸取受精卵,尽量紧密排列,再吸一段液体,吸一个气泡,再吸一段液体,共四段液体三个气泡。除较长的那段液体,其余的液体大致1cm左右,气泡0.2cm左右。将移植管口插入输卵管口,轻轻将移植管内的液体吹入,看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡,即移植成功。将卵巢连同输卵管放回腹腔,缝合肌肉和皮肤。0 E% s. R. ?: {" Q' w

+ U; P5 Q1 P% o- H. u" n/ h    10、受体每隔一个星期称体重一次,当第二次比第一次称重增加时,即可初步判断怀孕。手术后19~21天仔鼠分娩,待仔鼠3周后,剪耳、编号,剪尾,交分子组检测。
; @" z% e; t+ M" b6 v$ d9 n# F3 x% L* J0 J8 }

8 F, H: ^" Z0 q(一般选取4-5周龄的雌鼠作为供体,此时的小鼠卵数较多,状态较好。用pms诱导卵细胞成熟,用hcg超排。)! s- N1 r% G4 w1 {0 a

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发表于 2025-4-30 07:59 |只看该作者
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发表于 2025-3-31 06:38 |只看该作者
加油啊!偶一定会追随你左右,偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~  

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发表于 2025-3-25 21:11 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
感谢党和人民的关爱~~~  

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发表于 2025-3-3 00:10 |只看该作者
加油啊!偶一定会追随你左右,偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~  

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发表于 2025-2-28 11:54 |只看该作者
胚胎干细胞

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发表于 2025-2-24 23:43 |只看该作者
风物长宜放眼量  

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发表于 2025-2-16 04:34 |只看该作者
不知道说些什么  

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发表于 2025-2-14 15:33 |只看该作者
貌似我真的很笨????哎  

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发表于 2024-12-31 16:47 |只看该作者
一楼的位置好啊..  
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