干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 585167|回复: 282
go

转基因小鼠制备实验方法 [复制链接]

Rank: 4

积分
1405 
威望
1405  
包包
7439  

优秀会员

楼主
发表于 2013-2-18 01:19 |只看该作者 |正序浏览 |打印
1、 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。
0 H0 L- K: A+ k8 I! l# d% N7 E3 B7 s% H2 ]7 n( M
    2、 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。0 j, B5 U; e9 j1 G

" h( o! z9 F* l2 H    3、第二天上午9:00前观察供体、受体,有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。
2 B: y6 [# e+ N/ e
: Z" ?3 k+ @3 G    4、10:30左右,断颈处死供体,手术取出整个输卵管,放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。显微镜下,用镊子撕开输卵管壶腹部,受精卵随同颗粒细胞即一同流出。0 J, F, x9 v' g9 {

" O$ k6 F/ ^5 W7 q5 A5 s9 r    5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵,当受精卵周围的颗粒细胞脱离时,将受精卵吸出,放入M2液中洗涤,最后放在M16液中放入5% CO2,37C0培养箱培养。
; X- V+ c7 w% }, O" O8 d
- K% Y/ S& ~) Q    6、在显微镜下观察,挑选细胞饱满,透明带清晰,雄原核清晰可见的受精卵待用。
3 J( q4 T" V2 V+ W3 h: E% Z: z4 M6 L$ h1 o: l3 y$ y
    7、安装持卵针和注射针,使其末端平行于载物台,在凹玻片的中央滴入一滴M2液,覆盖石蜡油,移入待注射的受精卵。DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。% B$ C! D* A0 @
& f& a" m4 g1 t+ S; s6 M+ {$ J
    8、在高倍镜下,将注射针轻触持卵管,使DNA缓慢流出并控制其流量;反复吹吸受精卵,使其处于最佳位置,将注射针刺入受精卵的雄原核,直至看到原核膨大即退出。将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置,不致于混搅,注射完毕后,放入5% CO2,37C0培养箱培养。
3 Z8 f3 M  D/ J- Q
9 u" r. u6 J% G5 U) f    9、将受体麻醉,注射计量为1%戊巴比妥钠0.01ml/g,腹腔注射。手术取出卵巢连接输卵管,用脂肪镊固定,在显微镜下找到输卵管开口。吸取注射后经培养成活的受精卵,吸取方法是先吸一段较长的M2,吸一个气泡,然后吸取受精卵,尽量紧密排列,再吸一段液体,吸一个气泡,再吸一段液体,共四段液体三个气泡。除较长的那段液体,其余的液体大致1cm左右,气泡0.2cm左右。将移植管口插入输卵管口,轻轻将移植管内的液体吹入,看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡,即移植成功。将卵巢连同输卵管放回腹腔,缝合肌肉和皮肤。; F2 c5 P6 Y9 r) T; K0 t* z+ U/ u
, Y4 V9 `, }0 B; J/ A
    10、受体每隔一个星期称体重一次,当第二次比第一次称重增加时,即可初步判断怀孕。手术后19~21天仔鼠分娩,待仔鼠3周后,剪耳、编号,剪尾,交分子组检测。
( x$ I# g$ k# R9 J2 Y8 g% `" J- M- g/ G. M+ V" I

+ X$ s/ e- n$ i- E" W(一般选取4-5周龄的雌鼠作为供体,此时的小鼠卵数较多,状态较好。用pms诱导卵细胞成熟,用hcg超排。)
1 z1 s: X$ C: M3 a, X: W

Rank: 2

积分
71 
威望
71  
包包
1622  
283
发表于 2025-4-30 07:59 |只看该作者
细胞治疗行业  

Rank: 1

积分
威望
0  
包包
1636  
282
发表于 2025-3-31 06:38 |只看该作者
加油啊!偶一定会追随你左右,偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~  

Rank: 2

积分
123 
威望
123  
包包
1650  
281
发表于 2025-3-25 21:11 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
感谢党和人民的关爱~~~  

Rank: 2

积分
65 
威望
65  
包包
1618  
280
发表于 2025-3-3 00:10 |只看该作者
加油啊!偶一定会追随你左右,偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~  

Rank: 2

积分
131 
威望
131  
包包
1760  
279
发表于 2025-2-28 11:54 |只看该作者
胚胎干细胞

Rank: 2

积分
71 
威望
71  
包包
1591  
278
发表于 2025-2-24 23:43 |只看该作者
风物长宜放眼量  

Rank: 2

积分
179 
威望
179  
包包
1865  
277
发表于 2025-2-16 04:34 |只看该作者
不知道说些什么  

Rank: 2

积分
63 
威望
63  
包包
1789  
276
发表于 2025-2-14 15:33 |只看该作者
貌似我真的很笨????哎  

Rank: 2

积分
108 
威望
108  
包包
1674  
275
发表于 2024-12-31 16:47 |只看该作者
一楼的位置好啊..  
‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-5-29 23:17

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.