病毒感染细胞没有荧光，但检测有外源基因的表达

jiaocuihua123

我用pLM慢病毒载体，转染293ft细胞生产病毒，然后用其感染细胞，但是没有荧光，然后提取细胞RNA，反转录，经行PCR，发现有外源基因的表达，请问为什么会没有荧光呢，是载体出了问题吗，请大家指教。

misser217

同问……

sizhengliu

你的gfp序列是在目的基因序列后，还是前？

daviddow

我也遇到这种问题，既然有表达了就下续试验吧。可能和你载体有关，不是大公司的载体，可能就存在这种问题。

jiaocuihua123

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9 C5 B9 W& v3 `) E# E, V  z, M' k! r5 d- D6 a; r5 Q# ?
是在目的基因之后,用2A连在一起的,谢谢.

jiaocuihua123

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" i1 R# s' N1 @" h* L3 p/ V! n7 J1 e' G4 ]* r
嗯,但是想用阳性的细胞做克隆,所以没有荧光的话没法保证阳性率,只能是盲做.所以很麻烦,是不是载体变异了呢?

jiaocuihua123

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1 M( m' V) V& w! ~
; o/ L1 A6 G2 j不好意思,我记错了,荧光序列是在目的系列之前,通过P2A相连.谢谢.

sizhengliu

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, S( v+ P* C5 V( s& L4 r, I
- M# V$ H6 l  d; u( c0 r& S4 X9 s这就可以解释了，部分载体只表达了目地序列，到gfp序列时表达已经很弱，因此，你观察不到

neuralstem

用抗体染一下可能就看见GFP了4 s! \' z# a9 P

prophe

( ?* j0 T) Q) v; F: Z3 |
. s/ ^: h8 _( O6 S2 p- x2 a9 z
也有可能目的基因在细胞有本底表达，建议做一个不感染的作对照。