小鼠骨髓间充质干细胞 原代 两种典型的细胞

xiaoyurly

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8 D9 T3 p1 F1 F% n$ R6 ~全骨髓贴壁法2d时换全液，洗一次，然后传代时严格控制胰酶消化时间，MSC相对好消化，3min内大都能掉下来，杂细胞贴壁牢固，这样可以弃去一部分杂细胞，待3代时就比较纯

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+ X. f6 D4 U: i7 a7 }" h- t不知你用的周龄多大的小鼠，年轻一点的长的比较快，我们一般用4-6周龄。小鼠骨髓MSC确实比较难养出，除杂比较困难。有一点一定要注意，铺盘密度要大，传代时也讲究密铺快传，细胞长到80%满即可传代，2-3d一代一般

xiaoyurly

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6 D2 t8 S. O! s" A3 @- h1 V; y& R% [1 p7 b
不知你用的什么血清？小鼠骨髓MSC要用比较好的血清来培养，培养基加谷氨酰胺，细胞不扩增应该就是老化了。如果实在不行建议换用脂肪来源的MSC，性能差别不大，而且好养的多。上一张我们培养的C57的BM-MSC P6的照片，2只4-5w的小鼠铺一个10cm盘，48h换全液，5d有克隆，相机很渣凑合看看，传代到6代时细胞生长速度还可以，杂细胞有少许

xiaoyurly

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; f& ^$ y) ]& q. @( k骨髓来源，长得还可以，基本上2天传代，1传2，P3时流式鉴定CD29 93%、CD45 5%、CD44 88% ，CD90没测，有部分造血系细胞混杂，培养到后面没再测。但是骨髓来源MSC不太稳定，这次长得好下回却不一定，有点愁人，所以后来换脂肪源的了

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细胞死的比较厉害呀，是不是酶消化时间太长？？？室温消化，控制在2min之内