加fiicoll分血时分出的血清培养细胞对细胞有影响吗？

wenwen1228

加ficoll分血时分出的上清血清会有ficoll残留吗？养细胞时再加入培养基中对细胞有影响吗？请高手指教，谢谢！

weijunning

一般是将血袋中的血倒入50ml离心管中，配平2500rpm室温离心8min，然后吸取上层血浆，灭火离心后备用，主要是培养细胞过程用；将剩下的样本加生理盐水等体积稀释，混匀后缓慢加入FICOLL界上上，离心后的上清主要是加了生理盐水后稀释的血浆，一般都丢弃不用，没有利用价值的。

joe_binyang

回复 wenwen1228 的帖子( q0 N; J0 J1 j% N3 M: Q- w4 I
6 v0 ^, T$ D4 m/ E6 |2 L! Z$ s
先离心分离出血浆层的确是个获得血浆的办法，但这么做之后，浓缩的血液样本再用分离液分离要考虑分离液的载样量，即加大稀释比例，否则分离效果会变差，分离液是针对全血设计的，这是实际经验，望有用

wwxx66

回复 wenwen1228 的帖子# h$ o: F' T2 i& A

' g" v  U- m+ Z; A如果两周用完的话，4度冰箱保存就可以。如果长期不用最好-80度保存

wenwen1228

wwxx66 发表于 2013-4-20 18:22
( Z- X/ m2 u0 ?  T一定要先离心血液获得血浆，然后再用生理盐水或PBS稀释血细胞，再加到淋巴细胞分离液上。这样获得的血浆56度 ...

' ]5 q- U& [$ b; {* |7 H; w
离心还要在冷却后离吗？处理好的血清保存条件是什么？谢谢！

wwxx66

一定要先离心血液获得血浆，然后再用生理盐水或PBS稀释血细胞，再加到淋巴细胞分离液上。这样获得的血浆56度30min灭活，经4度冰箱冷却后，3000转离心15min局可以用了

sunny.yc

回复 ljs 的帖子0 r5 m# L1 t: E$ }' B! c) Q+ R* k/ g
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其实，还有一点是，质量差的的FICOLL里面也可能含有较高的内毒素或者重金属

realff

确实可以先离心血液，获得血浆。血浆可以通过高速离心等方法尽量去除一些蛋白质，但跟血清肯定不会一样。
; M2 e3 ?: i1 ?2 m/ X% I然后将沉底的血细胞加PBS之类的稀释，再用FICOLL分离。

wenwen1228

回复 ljs 的帖子% ?; g$ R9 C! P- @' l1 ?, Y

  Q* l' J5 S. l* w- X+ Y谢谢你的回答，对我很有用！

pengxuleo

回复 wenwen1228 的帖子0 l8 U0 x$ T; |9 A: k1 X

* z9 S8 k& w0 [# q1 q, p9 r& _建议不要用ficoll离心后的上清，一般梯度离心时，血液都会先稀释的，所以血清的浓度不高。4 h  N$ `  ^" i. M( M. i9 V: X

6 {( z" j7 R( W, s, R: I% K如果想要血清的话，可以直接离心血液，一般1500rpm-2000rpm离心20分钟，就可以获得血清了，同时可以参考“buffy coat”的准备。