荧光二抗效价1:10是指稀释比例吗

请叫我晓白

我买的羊抗大鼠荧光二抗说明书上写的工作效价是1:5-10 是指用的时候按1:5-10稀释吗
- w' }, w9 g8 v$ \6 m5 J, H这个浓度会不会太高了啊" G3 s1 I% D, B5 M# |7 {
另外二抗要求-20度保存
/ ]$ g. ]; N& E  T如果我最近一周经常用可否在4度保存一周呢？
9 b# q, I* b) q3 i2 s用之前需要离心吗？

huangcong1988

说明书上写的是1:5~1:10的话，您就按照这个比例稀释就行了啊，不过一般二抗的稀释度是100~200，如果长时间要是用的话，放4度放一周后也没有问题

youlesi888

可以放

Life_Tech

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6 b  J* @' l, |2 s- f8 L
1:5-10是稀释比例，但是这样稀释比例做出来一般背景都会比较高，应该说不是很理想的抗体。我们只有自己制备的抗体出现过这种情况，商业化的很少用这种稀释比例的。6 D- D8 O+ ]3 C6 a
4度存放一般问题不大，但是本来效价就不高，不建议你放4度。如果实在要放，建议你分装成小管的，将小管的放4度，如果不好用了再解冻其他分装的小管。

axh

可以加等体积甘油，这样放-20度还是液体状态，拿出来用了再放回，不存在反复冻融。但切记取用时混匀，因为甘油密度大，易沉底。

请叫我晓白

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' K4 z* D' r3 |) ^. o1 }  ?
! H0 \; C, P' m  T: a( D. `' a2 a$ u原来的规格是0.5ml，一般分装多少ul一管呢？
+ X+ d9 O- P8 I2 K9 a* W; C9 k" G如果分装需要稀释吗？如果不稀释会不会很少

Life_Tech

回复 请叫我晓白 的帖子, x4 w! [: k) q" v4 j

  J1 \4 M' L* q6 W0 i+ p; ]由于你的稀释比例太低，一张片子最少要加200-300ul才能覆盖，如果按照你的1:10的稀释比例，每次最少要用20-30ul。主要根据你的实验来吧，如果一次做的片子多，可以直接分成两管就可以了。如果每次做一张可以分装成100ul每管的，每管用个三四次。  z( b! \# S# k  M5 n; L
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分装是不稀释的，尤其是你现在的效价已经不高的情况下。用的时候再根据你要用的量吸出来稀释。
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以上都是个人经验供参考，不代表公司官方言论。

请叫我晓白

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4 r2 j3 U! O$ [( U" d) k) B" |一张片要200ul吗？可是我之前做的片50ul二抗就覆盖了心脏组织了。如果按每张片50ul的话，我做8张片需要400ul，也就是二抗40ul。是否是我之前的二抗加少了才会出不了结果呢？

Life_Tech

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3 B5 ?- r7 ?. Q) O0 c) @: i3 |也不是严格的说需要多少，只要你确保片子不要干了就行。有时候为了省抗体加得少也是可以的。如果你是在37度孵育尤其要注意了。

hbs08230

1:10 稀释出来不会爆么？？我们组用的萤光二抗是要稀释1:5000的。
. c' B9 o2 A8 i$ p9 ^6 k先做一个梯度测试一下吧，1:10，1:100，1:500，1:1000，1:5000。 6 u- v6 b" A- A1 D6 u) S6 S( k
有一个东西叫liquid blocker，像一支笔一样，可以在载玻片上圈上sample，然后在圈内加上抗体时液体不会溜出去~~最多用8ul就能覆盖一个sample了·省点3ul都能染~