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本帖最后由 cfr99 于 2013-4-7 16:11 编辑 , Z8 I" r1 B* A! `: S
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DC-CIK细胞培养方案
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9 R& q5 |2 J* m/ Y1、将采集的外周血收集到2支离心管中，2000r/min离心5min，弃上清，将沉淀细胞混合，到加生理盐水至25mL，使沉淀细胞充分悬浮。另取1支离心管，加入淋巴细胞分离液20mL，用滴管将血细胞悬液缓慢转移至淋巴细胞分离液的表面，使二者之间形成清晰的界面。
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1 J5 w+ a2 D' r+ W( g) K& \2、2000r/min离心20min后，从管底到液面分为4层，依次为红细胞和粒细胞层、淋巴细胞分离液层、外周血单个核细胞层（PBMC层）、血浆层。用吸管将PBMC层吸出，转移至另一支离心管中。9 [* b0 m: m( J6 t
" a& O; t) ]5 f: P3、加生理盐水至40mL，1500r/min离心5min，结束后弃上清，将沉淀细胞悬浮，加入生理盐水至40mL，充分混匀后，1500r/min离心5min。如此共离心洗涤3次。
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4、最后一次离心结束后，弃上清，将沉淀细胞均分为3份，分别转移到3个培养瓶中，各加入40mL的免疫细胞无血清培养液培养，分别记为A1、A2、A3。
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5、2h后取出培养的细胞，分别将A1、A2和A3中悬浮的淋巴细胞转移至另3个培养瓶中，分别记为B1、B2、B3。3个B瓶中加入IFN-γ，第二天加入IC因子（含有IL-2和抗CD3单抗），诱导培养CIK；3个含有贴壁细胞的A瓶中各加入40mL的免疫细胞无血清培养液和H1、Hb因子，诱导培养DC。
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9 `0 ?' U/ Y. |: K1 ]7 d6、DC培养过程中，如有发黄，则换液，补加H1和Hb因子。
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) V, k. U+ C3 V4 q$ |' @7、CIK培养过程中，如发现培养液发黄，则换液，换液后补加IL-2。如发现有细胞团块结为不良絮状，则用离心管收集后静置沉降5min左右，待絮状物沉淀后，小心将上清细胞悬液倒回培养瓶中。
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8、DC于第7天加入肿瘤抗原和TNF，第8天铲下收集后与相应的CIK混合共培养。DC瓶弃去。如果总的细胞量过于庞大，也可将DC和CIK混合后均分到A和B瓶中。- a4 `6 Z# r' A9 a# c# v
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9、共培养的DC-CIK于第10天做微生物检测。
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# `* ~5 q/ T: m8 U! }9 P9 W8 m/ }10、细胞悬浮液的制备：培养结束后，将培养瓶中的细胞悬液用离心管收集，1500r/min，5min离心洗涤3次，将25毫升白蛋白加入250ml盐水中，终浓度1%，加入细胞沉淀，配成细胞悬液。
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发表于 2013-4-7 16:11
