DC-CIK细胞培养方案

cfr99

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DC-CIK细胞培养方案
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9 K% ]: I6 ]" w9 A1、将采集的外周血收集到2支离心管中，2000r/min离心5min，弃上清，将沉淀细胞混合，到加生理盐水至25mL，使沉淀细胞充分悬浮。另取1支离心管，加入淋巴细胞分离液20mL，用滴管将血细胞悬液缓慢转移至淋巴细胞分离液的表面，使二者之间形成清晰的界面。3 K. M5 G4 ]* J" m
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2、2000r/min离心20min后，从管底到液面分为4层，依次为红细胞和粒细胞层、淋巴细胞分离液层、外周血单个核细胞层（PBMC层）、血浆层。用吸管将PBMC层吸出，转移至另一支离心管中。; F' E  H" B. w9 q" G7 s
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3、加生理盐水至40mL，1500r/min离心5min，结束后弃上清，将沉淀细胞悬浮，加入生理盐水至40mL，充分混匀后，1500r/min离心5min。如此共离心洗涤3次。6 T# _$ ?/ Q8 ~& K0 G

/ f& C4 W5 |5 {- r! E4、最后一次离心结束后，弃上清，将沉淀细胞均分为3份，分别转移到3个培养瓶中，各加入40mL的免疫细胞无血清培养液培养，分别记为A1、A2、A3。! e6 v7 K* ?* ]: t+ O

" R8 ~+ N! `4 W. e0 `9 C/ n5、2h后取出培养的细胞，分别将A1、A2和A3中悬浮的淋巴细胞转移至另3个培养瓶中，分别记为B1、B2、B3。3个B瓶中加入IFN-γ，第二天加入IC因子（含有IL-2和抗CD3单抗），诱导培养CIK；3个含有贴壁细胞的A瓶中各加入40mL的免疫细胞无血清培养液和H1、Hb因子，诱导培养DC。& E7 L9 L( l/ F( f- Z' A

2 s: R5 G) z3 k: C. v9 ]0 {6、DC培养过程中，如有发黄，则换液，补加H1和Hb因子。
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( v% x1 C; B3 H5 E( b8 }7、CIK培养过程中，如发现培养液发黄，则换液，换液后补加IL-2。如发现有细胞团块结为不良絮状，则用离心管收集后静置沉降5min左右，待絮状物沉淀后，小心将上清细胞悬液倒回培养瓶中。0 v5 i) w% r( C

+ q6 G) z" S& u1 Y$ Z6 Z7 w8、DC于第7天加入肿瘤抗原和TNF，第8天铲下收集后与相应的CIK混合共培养。DC瓶弃去。如果总的细胞量过于庞大，也可将DC和CIK混合后均分到A和B瓶中。
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1 w: `" k- |, f4 }! U0 Z: X: B' d2 p$ F9、共培养的DC-CIK于第10天做微生物检测。5 r$ `. V+ ^" O! w  P7 r

$ j) O! u; Y# H10、细胞悬浮液的制备：培养结束后，将培养瓶中的细胞悬液用离心管收集，1500r/min，5min离心洗涤3次，将25毫升白蛋白加入250ml盐水中，终浓度1%，加入细胞沉淀，配成细胞悬液。% _$ T7 M' ]9 y. J$ Q; z' S
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sunny.yc

回复 cfr99 的帖子# }! |- X0 O! ^( r6 k

) G1 ]6 P# y9 N7 r9 ~请问，诱导DC用的H1、Hb是什么呢？还有，为什么要分成A1、A2、A3，B1、B2、B3，DC和CIK各是3个瓶子呢，还有，瓶子各是多大的呢~  十分感谢！

大少爷

你们需要多大的血量，最终能够收集多少细胞。

lwr002

你们的采血量是多少呀？还有你们做这个一个疗程多少针的？250ml悬液细胞数量多少？培养多少天以后开始回收细胞？

luyue6453

你在第七天培养DC时加的肿瘤抗原？每种肿瘤你都购买相应的抗原吗？在哪弄的肿瘤抗原？

lwr002

回复 luyue6453 的帖子
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' u! t- X% G3 t5 \应该不用吧，可以用比较普遍的适用的抗原呀，比如癌胚抗原（CEA），大部分的肿瘤都具有的标志物

孙帅帅

请问： 加入肿瘤抗原的量有要求吗？