蛋白电泳上样量问题

微笑流滢

大家好，做Western跑胶时，所有要检测的蛋白都必须保证上样量一样吗？比如，要检测一个好做点的蛋白和比较难做的蛋白（如Actin），可以难做的蛋白加大上样量，而那个比较好做的蛋白少上点样吗? 每一次电泳所有样品的上样肯定一样的

sszxlijin

western是比较组织中某一蛋白的情况，总的蛋白量，也就是上样量要求是一样的。

微笑流滢

回复 sszxlijin 的帖子
3 H8 p3 c) }0 H' O0 J$ d+ W1 X$ e- s; Y
嗯，如果是检测一个蛋白，所有样品的上样量肯定是一样的，可是假如遇到不好做的蛋白。太小的上样量可能做不出来，所以可能会加大上样量。这样可以吧？？？还是，，，，，，，

sszxlijin

回复 微笑流滢 的帖子, A1 v% c6 c# j% W& D( i
' y, U  b. q4 F* m# H
可以加大上样量。

芦苇浅

一张胶片上应保证每一个点样孔的上样量是一样的，这样才能对比出组织中不同细胞间蛋白的表达量的差异，如果上样量不同，那么每一个孔间就不具有可比性了。

微笑流滢

回复 芦苇浅 的帖子1 J) R6 F( w  r5 [  q9 [1 J( l
/ \+ W7 c- p5 U8 X$ X
每个孔中蛋白的量肯定是一样的，但是有些蛋白如Actin好做，上5ug蛋白就可以出来结果，但是如果不好做的像磷酸化蛋白，每个样品上40ug 都不一定能做的出来，所以如果是同一批蛋白，就想多加一些蛋白把不好做的做出来。这样可以吧？我们老师说检测Actin和检测不好做的蛋白如磷酸化蛋白时必须保证所有样品都是5ug上样，可这样的话，磷酸化蛋白真不好做出结果那

微笑流滢

回复 sszxlijin 的帖子( j( y1 v5 \- E' M
- ?- |' P/ m. [( ~2 f
谢谢你

aulenuyah

个人觉得应该是可以的，不过点的样品要一一对应才行

250286645

之前做WB的时候，不是有两种梳子吗？做出来的孔都大有小，大孔的量是10微升，小孔是5微升，加样的时候尽量慢一点，枪头放下去一点，还有要在天气晴朗的时候做，效果要好些，制胶也容易些。我有时候阴天做就跑不出来条带

zsg

可以这样做，只要每个孔上样量一样就可以。如果两个蛋白要做比较，即使不是一次做，建议还是上样量要一致。