怎么检测是否有支原体污染

jiguojie87

1 培养基
( X. j) t% O( h. k 检验禽源细胞和由禽胚组织或其细胞制成的活疫苗，用改良Frey氏培养基。/ W, K6 x* Q" W0 W: L% \. ~% a
检验其他种类细胞和病毒活疫苗，用支原体培养基, v& s! P% R9 l6 C' l
检验血清 用无血清的培养基: t7 t! d1 x  X* W) @( a6 D# y9 X
2 检查法
: P2 }/ z' R, r/ h! a 样品处理 每批制品取样5瓶，液体需混合；冻干制品需添加液体培养基复原成混悬液后混合。检测血清时用血清直接接种。
6 j6 N" \& x4 M) g  ~+ K3 `疫苗的检测 接种于观察 每个样品需同时用以下两种方法检测2 E6 }' W/ B. F& K% [7 e% a- a
液体培养基培养 将疫苗混合物5.0ml接种小瓶液体培养基中，再从小瓶中去0.2ml移植接种于1小管液体培养基中，将小瓶与小管置于37℃培养，分别于接种后5日、10日、15日从培养瓶中取出0.2ml培养物移植到小管液体培养基内，每日观察培养物有无颜色变黄或变红，如果无变化，则在最后一次移植小管培养、观察后14日后停止观察。在观察期内，如果发现小瓶或任一小管内液体颜色出现明显变化，在原pH变化达0.5时，应立即移植于液体培养基和固体培养基，观察在液体培养基中是否出现恒定的pH变化，及固体上有无典型的“煎蛋”状支原体菌落。
9 Z) m$ H/ B* T! g5 @: ]6 x; ]0 B琼脂固体平板培养 在每次液体培养物移植小管培养的同时，取培养物0.1-0.2ml接种于琼脂平板，置含5%-10%二氧化碳。潮湿的环境、37℃下培养。此外，在液体培养基颜色出现变化，在原pH变化达到0.5时，也同时接种琼脂平板。每5-7日，在低倍显微镜下观察各琼脂平板上有无支原体菌落出现，经14日观察，仍无菌落时，停止观察。; Q9 [/ ?9 \, c) [
对照  每次检查需同时设置阳性、阴性对照，在同条件下培养观察。检测禽类疫苗时用滑液支原体作为对照，检测其他疫苗时用猪鼻支原体作为对照。
, u8 W9 e' N5 T% k, L  G 血清的检测 取本血清50ml代替培养基中的马、猪血清，按附录38页培养基配方配成大瓶培养，按2.2.1.2项稀释、移植、培养，观察小管培养基的pH变化情况和琼脂平板上有无菌落。, ^, p& w1 `  s* h+ J6 _
3 结果判定0 S; m' t9 F7 v4 |7 k
接种本物的任何一个琼脂平板上出现支原体菌落时，判定血清或者疫苗不合格。
$ Y; {. b- P! ~; P/ {, \0 j4 g 阳性对照中至少有一个平板出现支原体菌落，而阴性对照中无支原体生长，则检验有效。
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