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mayiwaiwai

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楼主

发表于 2013-4-17 11:43 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-4-17 11:52 编辑 3 D, \# j, N! Z( J5 O5 E

最近复苏的干细胞总是这个样子，速度慢，形态还不好，有泡泡的东西在边上，师兄说是不是支原体污染，不知什么原因？
无饲养层培养的E14，冻存使用的是90%FBS+10%DMSO。难道是冻存过程中污染掉了吗？5 x& g% L0 p( a; o1 s
这样的细胞传代过程中，胰酶消化后不是单个细胞，会粘在一起，明显的一块，这是污染的表现吗？
细胞粘附性是降低的，用PBS洗的话就会脱落呢，
求指点。。。555

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沙发

发表于 2013-4-17 11:47 |只看该作者

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luckywen

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藤椅

发表于 2013-4-17 12:36 |只看该作者

复苏细胞黏附抱团现象，细胞不好存活。可以试试用dispase2酶消化，使单个细胞分散开来再接种培养。这个酶相对胰蛋白酶和胶原酶比较温和，对细胞膜损伤小。一般情况下用培养基稀释即可终止反应。

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wf78365421

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板凳

发表于 2013-4-17 12:38 |只看该作者

没有污染。鉴定完毕。

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XIE冬D

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报纸

发表于 2013-4-17 14:04 |只看该作者

我刚开始养的小鼠ES也有这样的情况，大概就是细胞消化过度，及吹打造成机械损伤。我们实验室现在很少使用胰酶消化，除了做原代做feeder。

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mayiwaiwai

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地板

发表于 2013-4-17 14:45 |只看该作者

回复 XIE冬D 的帖子
- E3 y7 [$ I' ?5 M4 o/ a3 V
这是冻存的细胞出现这样，之前的没有这种情况，虽然也会抱团，但是长出来的形态还是好的，基本2天就要传代的，现在长的好慢，基本要3-4天的样子，做sphere的分化也不好，基本长不出来，就想知道我的细胞肿么啦。。。。。