干细胞污染

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- M; p2 j5 o0 `- i. f0 r4 O  R刚复苏的ES，可以看见这样的死细胞，被细菌侵蚀的，变成空壳，微小的点是可以动的，还会看见细长透明状的，也会动，附着在细胞上，分布在培养基，冻存前细胞是好的，留有一盘继续培养了一段时间，也就是说，要么DMSO污染掉了。要么是冻存管用的时候污染了，另外冻的细胞也会看见这种情况，想请教两个问题：DMSO能被污染吗？有没有同学也遇见这样的污染，像这种细菌在皿和皿之间传染么？

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8 ]8 o1 q: V6 P+ S! h1 l
' p) d" H. P& }2 n9 \0 j- I水浴污染的话细胞应该不是这样子的，起码不会看着像死掉了，这是刚复苏还没有培养的细胞，冻存的时候状态还很好，留着一盘养了很多代的。个人觉得是冻存的过程中出现污染，但是两批都污染就说不过去了。觉得可能是冻存液的问题---DMSO，或者是冻存管

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% t7 i$ L' _8 T9 k, b怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

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回复 yuhaoze 的帖子8 B7 P6 k& U& Q6 w" P
3 D, Y7 U# Q4 q, q1 A& M
怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

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: x1 e/ y0 e* g4 v* ?怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

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6 C0 d# I! L! Y5 ~8 n
, ~8 W' L1 I9 N  b7 n/ M没有测活率，刚复的细胞里看着正常的为数不多，之前也这样继续养过，发现这些东西是不能随着传代换液去掉的，长得慢，贴壁能力下降，PBS洗的话都有可能脱落。分化更是不能做出来。要说复苏的时候出现问题，死的也不会这么快吧，何况那些会动的东西是复苏得来的，应该是和细胞一起冻存啦，困惑的地方在于啥时候变这样的，冻存前是好的，-80待一晚上，就放液氮的，复苏后就这样啦。所以怀疑DMSO和冻存管

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回复 yongchen1314 的帖子& a; C  r2 C( J; j. O( C/ |9 Z

8 B% i% |6 N' c/ z+ }那是什么呢，干细胞经不起折腾，这批细胞是不能用了，长不起来

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回复 kjeldahl 的帖子! l# R. @3 k$ W+ `7 n2 o1 |) {

- ^$ C. U, L8 i: Z这是40x的呢，对我们的镜子是最高倍了呢，还没贴壁就这样的，复苏后直接观察的。水浴锅是没有问题的

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5 M/ t# M; b! o; j3 }6 ]* Z
* ?- U8 j2 y* e: Q  z2 P8 h冻死了？过期的DMSO有问题么？

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$ Y' _! C7 c. M" G
: a6 r$ l7 {  d9 A0 d请问高手怎么解决的呢？复苏一只别人实验室的细胞株，结果也是这个样子，，传一代就不行了，该注意的地方都注意了的，那些东西又会出现，贴壁不好，长得慢，也去除不掉，差不多12小时换液的，