干细胞污染

mayiwaiwai

$ c7 a7 U, J, j+ w7 i
刚复苏的ES，可以看见这样的死细胞，被细菌侵蚀的，变成空壳，微小的点是可以动的，还会看见细长透明状的，也会动，附着在细胞上，分布在培养基，冻存前细胞是好的，留有一盘继续培养了一段时间，也就是说，要么DMSO污染掉了。要么是冻存管用的时候污染了，另外冻的细胞也会看见这种情况，想请教两个问题：DMSO能被污染吗？有没有同学也遇见这样的污染，像这种细菌在皿和皿之间传染么？

wuhuizi

是不是复苏的时候 水浴的时候污染了呢？或者就是冻存的时候i就污染了，细菌复苏能力比细胞强多了。

mayiwaiwai

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( G5 `/ T: r" k2 Z4 ~5 ~) K: Y5 b" q/ T; V# j$ n
水浴污染的话细胞应该不是这样子的，起码不会看着像死掉了，这是刚复苏还没有培养的细胞，冻存的时候状态还很好，留着一盘养了很多代的。个人觉得是冻存的过程中出现污染，但是两批都污染就说不过去了。觉得可能是冻存液的问题---DMSO，或者是冻存管

yuhaoze

这是凋亡，细胞凋亡，不是细菌侵蚀的空泡，这样说很不专业。
5 B4 v( x: V* E6 S9 sDMSO不会染菌，这么大的毒性，很有可能空气污染。查查支原体吧，冻存前细胞状态好不代表没有污染，如果是真菌或细菌，不会是现在这个样。

mayiwaiwai

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+ H+ N& Y! D; y. I/ e2 e怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

mayiwaiwai

回复 yuhaoze 的帖子  U* y, i2 s  g3 s

% u+ j6 a. Q! w' y! ?2 G怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

mayiwaiwai

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怎么会凋亡呢，如果继续培养一天的话培养液会变浑浊的，这是刚复的细胞，支原体肉眼不是看不到么，所以就排除了支原体污染。还想着是不是在液氮中污染了呢，但是能在液氮中还存活的细菌应该没有吧。那些会动的不是细菌么？

wf78365421

你是说“刚复苏的ES，可以看见这样的死细胞，被细菌侵蚀的，变成空壳，微小的点是可以动的”，我觉得刚刚复苏的细胞，不可能立即污染，“被细菌侵蚀的，变成空壳”，因为细菌增值需要时间的。除非是你冻存之前就是污染的，细胞已经被细菌侵蚀。但如果冻存之前就污染了，那你肯定早就发现了。是不是你复苏的问题?复苏出来的细胞都是死细胞？你有没有测测你复苏细胞的活率？

mayiwaiwai

回复 wf78365421 的帖子7 Y! _% e% e" {5 v: `
( C& G& i, |  n* r! n; D
没有测活率，刚复的细胞里看着正常的为数不多，之前也这样继续养过，发现这些东西是不能随着传代换液去掉的，长得慢，贴壁能力下降，PBS洗的话都有可能脱落。分化更是不能做出来。要说复苏的时候出现问题，死的也不会这么快吧，何况那些会动的东西是复苏得来的，应该是和细胞一起冻存啦，困惑的地方在于啥时候变这样的，冻存前是好的，-80待一晚上，就放液氮的，复苏后就这样啦。所以怀疑DMSO和冻存管

lwr002

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- L4 s& M2 x# A- H* E2 Q
$ t, s  M3 @( j) {, Z1 C从图片上来看，这不像是污染的细胞，而且就算是污染了，你也不可能复苏以后马上就能看得出来的。刚复苏出来的细胞，还没有贴壁，悬浮的时候是这个状态的。你应该等6个小时后或第二天，细胞贴壁以后再下定论。还有复苏以后最好记一下存活率，你冻存前后都没有测存活率吗？冻存前后，如果怀疑细胞污染的话最好做下无菌检测。DMSO毒性很强，不会被污染的。还有如果每次都这样的话，那是不是考虑下冻存液的配比有没有问题？