求助：小白求教IPS的各种鉴定方法

whether

烦请各位大虾详细说明

chunlanchen

GIBH干细胞实验室所用的方法是：7 O$ H5 Q3 Y! x0 C6 W+ Z
1、插入鉴定：观察iPS是否插入了四因子
4 Z! J! O1 E  ~- Z2、核型鉴定7 p9 M; T. _$ m' e( P# k
3、Realtime PCR 检测iPS外源基因沉默及多能性基因的表达水平
& [) n* G' v1 ~  L3 W' _4、免疫荧光鉴定胚胎干细胞标志物在蛋白水平的表达
; w& o* S' D3 j5 @2 W, h' K5、双硫测序方法鉴定多能性基因启动子甲基化水平
* ?' k- l7 n4 T& U- q) ~( _6、皮下注射畸胎瘤
. v2 S, q4 k: H% S7、嵌合体注射鉴定分化潜能

whether

我自己总结了一下 大家看有什么问题
( h4 n( K8 H2 n( @) d3 g' a) ~! V* M3 V; A# s- W
yamanaka 筛选因子时使用的方法：在Fbx15敲除鼠的基因组内，Fbx15基因被neo基因取代。在成鼠角形的成纤维细胞中，内源的Fbx15 启动子关闭，neo不能表达，细胞在G418药物处理下会死亡；在圆形的多能干细胞中，Fbx15 启动子会启动neo，细胞能在G418中生长。成纤维细胞在体外培养后感染携带干细胞维持因子的逆转录病毒，如果能够被重编程成多能干细胞（iPS），就能逃过G418的选择压力，增殖形成细胞克隆
& a7 i7 R1 X& @
& d; b% S/ Z9 N) D, d9 p: v( Z  f其他鉴定方法
+ {7 D( w0 F3 N: b+ S9 c- j) V( d1.Bisulfite Genomic Sequencing - e. N% |5 C9 T2 f* z7 H. a. L
亚硫酸氢钠基因组测序，分析iPS细胞中的去甲基化，保持甲基化状态
" B: w6 Q5 ~% {/ _: E1 B6 y, Z - A0 K( J* d* i
2.Determination of Karyotypes and SSLP by PCR
* d* E+ b/ s4 L4 ]2 x1 [: j  S; M分析染色体组型与简单序列长度多态性（被称为第二代DNA）4 N1 N9 j' d* M5 E5 I) y3 k

4 x& E* M' p, \( ?; N3.Western Blot Analyses # m! m8 ^" A( a4 Y# B& l5 A& O
通过Western Blot检测干性基因蛋白的表达
8 P& w6 u1 A0 ^) T$ Y5 z
0 Y" \( c9 {% w9 R4.RT-PCR for Marker Genes . k0 {& V# c$ Q# W$ L5 y
检测干性基因表达
7 w: G2 F- X* d/ l! @" ]# ^ 1 V8 a3 A6 {2 G/ k3 }& N
5.DNA Microarray + ?/ y1 K( M- n
基因芯片。。。
7 Q3 b- _! L0 T! x/ Y
5 B- E6 A8 c3 k1 t; Z  C3 r; O6.In Vitro Differentiation of iPS Cells 8 C& r! t% A( Y$ l% n1 [  T, k7 `2 R) R
体外分化。。。ips-mef4-7细胞皮下注射进裸鼠后，肿瘤分化出多种组织; P. C2 j  Z/ ?# q) W" w

supercell

这是最早最经典的nature protocol，供参考。

frankieisme

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6 l$ c3 c/ |& h( ?1 q3 ]iPSC的鉴定：核型、基因表达、体外分化能力、体内多能性检测等多方面.