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我自己总结了一下 大家看有什么问题; V; s) Z0 Z) D) o4 c) \; ^
) x3 o9 X1 E8 `8 G) x. x" t" y
yamanaka 筛选因子时使用的方法:在Fbx15敲除鼠的基因组内,Fbx15基因被neo基因取代。在成鼠角形的成纤维细胞中,内源的Fbx15 启动子关闭,neo不能表达,细胞在G418药物处理下会死亡;在圆形的多能干细胞中,Fbx15 启动子会启动neo,细胞能在G418中生长。成纤维细胞在体外培养后感染携带干细胞维持因子的逆转录病毒,如果能够被重编程成多能干细胞(iPS),就能逃过G418的选择压力,增殖形成细胞克隆 7 e I$ E/ l5 W! ]
, L! h* @: |! b/ X8 a4 L
其他鉴定方法3 q) B; N4 w+ u K5 V" H
1.Bisulfite Genomic Sequencing
" Y8 S, x5 f3 {4 u- r: }亚硫酸氢钠基因组测序,分析iPS细胞中的去甲基化,保持甲基化状态% C' x5 r; _0 p5 l( }
$ a R! h4 e7 i) l% A. A2.Determination of Karyotypes and SSLP by PCR ( c2 F1 Y1 M7 H; S* e0 H
分析染色体组型与简单序列长度多态性(被称为第二代DNA)
, U* {, C" H h" V' o* Z: q3 N
0 J' T" d3 F. m* ]* C( H4 a3.Western Blot Analyses
* f1 T4 m$ H4 e- W- G通过Western Blot检测干性基因蛋白的表达
7 c9 G5 {+ S9 E, y$ ]2 H/ L, E , k3 w U' [: ?9 ~- S. t
4.RT-PCR for Marker Genes - ^0 T6 K: [4 a9 Q" C/ v
检测干性基因表达$ l1 D' c9 ]$ L3 W. _" ^0 A0 g- L
4 p* Z, n; V' ^5.DNA Microarray / ^8 W9 Y" Q4 P3 `/ l" j
基因芯片。。。
5 c" A( ^+ n( H" Z
$ Z/ ]( F) d+ |" g N6.In Vitro Differentiation of iPS Cells . M- ]+ Y: h" i5 K
体外分化。。。ips-mef4-7细胞皮下注射进裸鼠后,肿瘤分化出多种组织
( s. @1 ?; W+ J |
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