脂肪干细胞提取制备

zhangjieyctc

1.脂肪干细胞提取所用的胶原酶是几型的？浓度是多少？消化时间？$ m/ k/ Z9 p6 c* G  k% m" K, i
2.Collagenase P 是几型胶原酶？

wf78365421

" q/ U. w* w! l: @
胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。9 l" S9 x5 ^* Y# t
1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞，用于哺乳动细胞的分离。
7 p: b% i# n- H7 R" R9 i2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。4 S2 n$ R. A1 j) L
3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。, ~6 B# m$ w% C* s% y6 K
4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。3 n! ^- ?# [  H
/ ]" P% k5 D& W+ z3 j5 h
胶原酶的配置
( t6 j  L" H% a; U/ i胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。0.22um过滤除菌。可用HBSS（如D-hanks或者PBS）或DMEM培养液配制。最好现用现配。也可以配好了零下20度保存，用时解冻即可。+ m5 J4 p5 J: Y6 Y( o2 e

# z) n1 o3 u0 w& ~5 t) m2 _7 w/ j* u* X, h$ v7 e
脂肪干细胞胶原酶是I型 质量浓度0.1%，37度消化30min-1h,* j& O8 r* N, ?6 _: [+ n! \
, K% ?0 T3 _, R3 I" q

* H5 ?. F* O; q; @Roche 的胶原酶 P 是用于胰岛分离的，相当于 SIGMA 的 V 型，

deshenglll

你上网上找啊。群里就有

倔强的投手

用P也是可以的，我刚开始的时候就是用P，也能提取出细胞' S5 n' R  f9 S8 q  e2 s# P% n
胶原酶的浓度是0.1%+1%BSA，我一般消化90min

wf78365421

回复 倔强的投手 的帖子0 d+ T* y$ w# K# L& d% I9 Z

- v0 ]9 l: I, }7 P1 U/ g3 X90分钟时间太长了。对细胞活率有影响。

zfgxb

0.1%的I型胶原酶加上0.25%的胰酶，比例1：1，37°C消化时间30分钟足够了,过度消化对干细胞有影响