胎盘干细胞原代培养

zhangjieyctc

胎盘干细胞原代培养，在分离的过程中，发现碎片比较多（碎片对细胞贴壁影响比较大？），如何去除碎片，离心速度和时间分别是多少？

452359357

回复 zhangjieyctc 的帖子% B7 V7 I6 Q0 |9 g  j
- |. X8 A. o- Z- ?3 {+ B% l; N
我们现在用胰酶分两次消化  每次15min  没有多少碎片啊 离心是300g 15min

zhangjieyctc

回复 452359357 的帖子3 D  A: e* U  d/ f& s& b' P$ r9 N
4 {5 k! Y6 G6 F2 B% j" o( @
如何用胰酶两次消化？求详解，越详细越好，我可以参考一下

zsc78

这是我的实验方法，分离的细胞还不错，仅供参考：
0 r# A% c9 G) w: K1.用含双抗的PBS运回实验室；
" y6 m4 \! i& ~( V7 h! F7 W2.用PBS尽量漂洗除去血液，用筛网刮下胎盘绒毛组织，剩余的血管组织丢弃；
2 Z: H6 t# {1 c& r3.将绒毛组织用0.1% I型胶原酶，在37℃水浴箱间隔震荡消化1小时；* t: ]2 s. s; e- \# r- f
4.先后用50目和100目筛网过滤消化组织；
7 X- G/ t, O' t' c" p8 r* z5.收集液体，2500rmp离心5min；收集沉淀，2 g/ B) [: X" m8 R, b
6.用含10%FBS的DMEM/F12重悬接种2个培养皿（10cm）。

song0610

学习了

zhangjieyctc

回复 452359357 的帖子
% [# W. ?4 P( o) D, h6 k/ m8 [; a" t, @
300g，15min，这个速度和时间是不是都有点过了啊，我平时消化离心的速度的速度也就1200rpm，6min；300g>1200rpm，15min也比较长，这样的话碎片也同细胞一样沉淀下去

willow0711

: C- P6 @" }+ L/ H

zsc78 发表于 2013-6-3 22:16 ; l; s3 I. r$ b! T, C3 `3 q+ X
这是我的实验方法，分离的细胞还不错，仅供参考：
: ]  K3 o8 ^9 C; l$ M1.用含双抗的PBS运回实验室；% L+ @! a' s& P
2.用PBS尽量漂洗除去血液 ...

0 G2 U2 a1 u- Z  Y" F3 R
* i# s4 C- v9 c: d0 ~
你好，请问您分离的方法适应于胎盘的小叶吗？谢谢！

wf78365421

回复 zhangjieyctc 的帖子; f2 o/ t1 o5 V; V# B, k

; o+ N& h5 p0 X不用去除碎片的。

zhangjieyctc

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! z" a& S) s" l( t2 l& j0 ?) h8 @( }; `* `; A# n
这样做红细胞和碎片不是很多吗？？如何去除的

452359357

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: |. K2 P# k3 ]7 }$ z
3 R5 i  p2 r8 r" k! p2.用PBS尽量漂洗除去血液，用筛网刮下胎盘绒毛组织，剩余的血管组织丢弃；+ M' J6 K9 H! d' |! I- R# p
第二步是关键 要用大量的PBS去冲洗 红细胞就不会太多了