【求助】免疫荧光神经球的贴壁

jojomayer

求助各位：0 i/ o- U3 n( o  }

; w, y9 D; }, u/ Z  u7 u小弟现在需要做胶质母细胞瘤悬浮球培养的免疫荧光实验，我用的是实验室里前人留下现成的，一张载玻片上分为8个小室的chamber slide (BDFalcon, Cat. 354118)，目前遇到的一个重要问题是神经球贴壁非常困难。我试过了多聚鸟氨酸，多聚赖氨酸，还有明胶，效果都不够好，层粘连蛋白效果稍好点但是太贵。(都按照产品说明书的步骤)
1 S% Y/ k0 A+ ]9 p7 [, E另外在尝试采用多聚赖氨酸包被和多聚赖氨酸+明胶包被的时候，发现这两种液体很难在载玻片上浸润，难道这个载玻片是低粘附的？
& f, |2 J; W+ k0 m: t2 w请问大家有什么比较好的促进神经球贴壁好进行免疫荧光的办法？
( B* F+ o" g( L  M+ _# b* A5 o0 a! e- _; n. m/ Z& p8 q
另外附上一张来自文献的，理想状态下的图片(见右侧两张)：4 e6 W' }: x) D1 D% h& C  H

jojomayer

回复 karinahui 的帖子9 `  ~1 J8 L# n
4 Q( F; ]  b" k3 Q. D
感谢，完了我再试试别的chamber slide
# I% p- O. R, G3 C' I5 g) C, H/ }1 h不过在我曾经觉得一款塑料质地的chamber slide效果比较好的时候，我的小老板曾经说过一次：貌似有人说塑料的chamber slide容易产生假阳性结果？谁听过这个说法？有什么根据吗？我小老板说的时候只是说听人家说~~~呵呵

karinahui

回复 jojomayer 的帖子
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1 M" v' Q& F: V/ x$ e试试 laminin或PLL等37度或室温包被过夜？或者换别个牌子的增强粘附的chamber slide，如Nunc的一款。我也没试过，仅供参考。

jojomayer

7 m/ X; o; p% i" }  L% v

$ K+ L; S' N" N  q, n( e回复 yuanyan2010 的帖子
4 ~$ M, q$ N+ Y4 ?) v4 e" B. S
7 \# @" ]' P, ~% U, P' A你好，感谢关注！我使用过的试剂是：+ F% {6 w' _0 }9 c* t# G& |* V, E
Poly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707): R! T# x' `0 {( m$ M- }" G
Poly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957)
% T2 T# q7 u/ @, w- |Fibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)
( K; k. n5 F4 t- n  L# i以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？
8 D% v! s& U( }3 {% E9 V% I. l9 O; S9 U- U. j& ^" m% o0 k4 u
Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)/ R* g3 l: d* @8 |. l
这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。$ z, v2 [! C. J! P! ?
Gelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
& l8 z5 p2 |+ A+ B* I( M这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。
0 ^  `3 e! Z' y9 @/ D
6 A& {1 H# n; Z( A! q请大家讨论一下，到底怎么样是最好？

jojomayer

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7 v, r/ Y; ~, y, X* \( O回复 yuanshenyewu 的帖子
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; r9 [* D; s5 A5 A2 w; U你好，感谢关注！我使用过的试剂是：7 `/ ]; [5 {0 R5 J# I0 d: H8 z% `
Poly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)
; ^9 ^6 U9 L( w8 w' p  o3 _Poly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957). d  }  C; @% Z
Fibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)/ P) g; O; `% ~  }" p6 a" {
以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？
# J7 G; E9 w: X  p* ^0 A3 D. Z( _/ B. f. E% ?
Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)
" w, p8 P1 |3 J) ?  @+ q# p这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。( N! w+ _! {& R! n
Gelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
6 J( h2 U6 w) ?' F7 g: @: W这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。0 y1 N# h: u2 d" T5 Y4 h4 I

/ ~5 _' t6 V9 W/ K( I请大家讨论一下，到底怎么样是最好？
6 O, \' o) Y3 N8 L3 O: Q, B, \( E

yuanyan2010

多聚赖氨酸+laminin

yuanshenyewu

右旋多聚赖氨酸不行么?