【求助】免疫荧光神经球的贴壁

jojomayer

求助各位：1 T" f. m2 f( _: t5 D5 c, m4 L

' }' O8 h% z8 W' p小弟现在需要做胶质母细胞瘤悬浮球培养的免疫荧光实验，我用的是实验室里前人留下现成的，一张载玻片上分为8个小室的chamber slide (BDFalcon, Cat. 354118)，目前遇到的一个重要问题是神经球贴壁非常困难。我试过了多聚鸟氨酸，多聚赖氨酸，还有明胶，效果都不够好，层粘连蛋白效果稍好点但是太贵。(都按照产品说明书的步骤)4 c4 r  f2 {3 t) w
另外在尝试采用多聚赖氨酸包被和多聚赖氨酸+明胶包被的时候，发现这两种液体很难在载玻片上浸润，难道这个载玻片是低粘附的？
( r  I; i3 x0 j请问大家有什么比较好的促进神经球贴壁好进行免疫荧光的办法？- \) y+ K0 ~4 }# F9 R( S2 |5 H
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另外附上一张来自文献的，理想状态下的图片(见右侧两张)：
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yuanshenyewu

右旋多聚赖氨酸不行么?

yuanyan2010

多聚赖氨酸+laminin

jojomayer

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8 Y$ M/ P2 ^0 N+ @+ g  q' \1 K' m2 A+ E8 w$ w7 j1 `
你好，感谢关注！我使用过的试剂是：
7 X* l- A1 V& oPoly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)/ P% a! t) z) V
Poly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957)
, x3 ^* H& R: o. }0 gFibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)
: p% U8 O) y  m7 A- w0 Y以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？
7 m( U5 {! w+ Z0 P: k4 t: O' s3 F0 O& W+ r! F6 u1 H
Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)  w6 Q$ k2 V: c! Y
这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。
& q/ u  U4 G  _, P# L4 [Gelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
9 @% P  D$ Z$ M) K: d这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。
: r6 z& m1 [4 d  ^' Q
) U4 R! `9 x  p  W+ t! ~! ^请大家讨论一下，到底怎么样是最好？4 [9 @4 X6 p4 I3 e, c( A$ Z

jojomayer

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8 c3 E- d. X% v2 N# y回复 yuanyan2010 的帖子
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你好，感谢关注！我使用过的试剂是：
3 X- `; J+ r! v0 I7 ?1 o0 q$ gPoly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)
3 W- C+ ]+ c3 \  V5 FPoly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957): [3 [2 i( o1 R
Fibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)
& v  x. S# M( ~9 w以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？* x' t5 D0 ^1 G0 k6 H
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Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020). O! U5 h! q! ~$ v- `4 g1 G" d
这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。
6 X. F0 H& L2 E' |/ p. q# r0 \Gelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
/ a% B9 S/ N; K% A6 v" x) \. |这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。" ^9 _/ E4 k4 z% ]4 Z
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请大家讨论一下，到底怎么样是最好？

karinahui

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$ l3 u) F9 a, N4 o& h3 }: A/ @( t, t" P1 B" J7 O2 V% G5 H+ F# D
试试 laminin或PLL等37度或室温包被过夜？或者换别个牌子的增强粘附的chamber slide，如Nunc的一款。我也没试过，仅供参考。

jojomayer

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" u9 p  w& g5 J( Q% _+ {感谢，完了我再试试别的chamber slide
- V, s) z/ G4 [6 u& a不过在我曾经觉得一款塑料质地的chamber slide效果比较好的时候，我的小老板曾经说过一次：貌似有人说塑料的chamber slide容易产生假阳性结果？谁听过这个说法？有什么根据吗？我小老板说的时候只是说听人家说~~~呵呵