【求助】免疫荧光神经球的贴壁

jojomayer

求助各位：; D6 F% p/ R; O8 y1 J8 F
  y  q) ^* J1 |0 _
小弟现在需要做胶质母细胞瘤悬浮球培养的免疫荧光实验，我用的是实验室里前人留下现成的，一张载玻片上分为8个小室的chamber slide (BDFalcon, Cat. 354118)，目前遇到的一个重要问题是神经球贴壁非常困难。我试过了多聚鸟氨酸，多聚赖氨酸，还有明胶，效果都不够好，层粘连蛋白效果稍好点但是太贵。(都按照产品说明书的步骤)
' m- L  A' g2 a. n4 r另外在尝试采用多聚赖氨酸包被和多聚赖氨酸+明胶包被的时候，发现这两种液体很难在载玻片上浸润，难道这个载玻片是低粘附的？
" |/ q# G/ Q! I4 |/ D9 D2 |请问大家有什么比较好的促进神经球贴壁好进行免疫荧光的办法？, N6 ]) N' L0 E  {0 e
! |. \( m- L! p9 u# q. _; ^
另外附上一张来自文献的，理想状态下的图片(见右侧两张)：
$ M+ l( f/ c- U; D; w

yuanshenyewu

右旋多聚赖氨酸不行么?

yuanyan2010

多聚赖氨酸+laminin

jojomayer

' f" \5 S5 m1 m$ [" j& x

9 n$ {% z4 ?* G  @; R回复 yuanshenyewu 的帖子
9 N1 P. [9 @8 J, V) M6 D9 P9 J" g: `  Y6 f7 ]" f7 Q1 U: z
你好，感谢关注！我使用过的试剂是：. `6 ^. ?4 Q1 {4 J
Poly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)
2 Q+ e. V& M8 l# ~2 V3 Z; dPoly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957)
# y4 z7 s% G( W% T3 dFibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)
' `" A! K. C$ \. ?* V3 p  U: r以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？
: p& G: v, y5 l9 m5 K2 ?$ K! O8 W, E
( p( I  O9 b' ~4 ALaminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)
5 [$ f5 Y) F" ^; [, l; X: i这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。
' j6 {6 J9 x8 L- L# I3 s  gGelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
8 Y. S' G; F( w* l这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。, ^0 b! F) R1 A

7 M' b+ j5 U, M! C" u请大家讨论一下，到底怎么样是最好？2 G% Y1 u  v- T& G

jojomayer

# R& a8 f5 X9 c* B' ?, \" D; D
4 w/ W$ S1 w+ ?3 y, p. n  z回复 yuanyan2010 的帖子
" f, X$ |7 {2 b/ t- E' M' U* _5 |/ e& j9 n/ D, l3 q: @  ?) ]
你好，感谢关注！我使用过的试剂是：
* X& x9 E! ]9 F2 W6 t; ?1 tPoly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)* m  w' M2 \; Y9 f
Poly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957)
/ f% H9 }! g9 ?' w* f7 tFibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)! Z1 K+ e: u( }% j4 p3 r
以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？
) N' b; Q  D/ `  P4 l9 |" g9 d. u4 V! w) p- Z* v; N
Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)
' Z8 q, U0 s# t0 B这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。
' ?- E+ y$ \4 m" |5 B7 G8 vGelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
7 |7 Z4 z; S' I9 n# v, i这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。
! Q* ?; `  l# n  H
3 u3 J  D. K2 O请大家讨论一下，到底怎么样是最好？

karinahui

回复 jojomayer 的帖子. n6 P8 ?9 u" D5 x4 P

# J* \4 l5 B* i( ~3 p( d) @试试 laminin或PLL等37度或室温包被过夜？或者换别个牌子的增强粘附的chamber slide，如Nunc的一款。我也没试过，仅供参考。

jojomayer

回复 karinahui 的帖子
6 K( r6 U* d* j; k) }" e; S; |9 J) K( {; U7 x
感谢，完了我再试试别的chamber slide+ ?: ^* A0 L" J; U; u7 O
不过在我曾经觉得一款塑料质地的chamber slide效果比较好的时候，我的小老板曾经说过一次：貌似有人说塑料的chamber slide容易产生假阳性结果？谁听过这个说法？有什么根据吗？我小老板说的时候只是说听人家说~~~呵呵