【求助】免疫荧光神经球的贴壁

jojomayer

求助各位：# ~" a# i7 }; I( d4 o0 b  I1 A

" U) a% x2 b+ [4 b4 _; C小弟现在需要做胶质母细胞瘤悬浮球培养的免疫荧光实验，我用的是实验室里前人留下现成的，一张载玻片上分为8个小室的chamber slide (BDFalcon, Cat. 354118)，目前遇到的一个重要问题是神经球贴壁非常困难。我试过了多聚鸟氨酸，多聚赖氨酸，还有明胶，效果都不够好，层粘连蛋白效果稍好点但是太贵。(都按照产品说明书的步骤)
3 g7 N% Z: Z3 D3 {0 d8 I6 W另外在尝试采用多聚赖氨酸包被和多聚赖氨酸+明胶包被的时候，发现这两种液体很难在载玻片上浸润，难道这个载玻片是低粘附的？
2 M: d" g  m# ^' J请问大家有什么比较好的促进神经球贴壁好进行免疫荧光的办法？
, F! \; B& R7 ~! d5 |
( i1 J3 N# d/ Q* q2 I另外附上一张来自文献的，理想状态下的图片(见右侧两张)：) J$ {  A0 i$ A

yuanshenyewu

右旋多聚赖氨酸不行么?

yuanyan2010

多聚赖氨酸+laminin

jojomayer

+ k! y& z9 i5 Q$ t
% |8 U( h/ Y' o
回复 yuanshenyewu 的帖子0 `1 `. `5 ~& z; _, a5 D

$ a& U8 U" N, p$ {2 I你好，感谢关注！我使用过的试剂是：
" \/ x  @0 U/ a- }2 t. EPoly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)
  I6 m! K' B0 L3 ?: g# `Poly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957)
  I* t2 d5 J8 B7 c  a+ _: jFibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895), i0 R/ \! J3 J8 e: j) Q; F- j
以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？# S0 t* U* m, v6 \& V2 p# p0 U$ \( o
/ G' R# v& p! P' e  x, ~) d% s
Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)
* K# s! L( |3 W1 F! x$ W( j这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。
3 z$ O2 C) K5 [4 I; mGelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
0 w# N1 ^- z) i6 H) K! W0 J这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。0 v( o; E, }& J7 L
, K, X% Q1 r( |: F
请大家讨论一下，到底怎么样是最好？% L- Q5 j( B; @, e; y$ D. V8 c

jojomayer

2 o% e% g& G' J& g/ h; q' m( E! A" m" k' r$ T
回复 yuanyan2010 的帖子6 D0 ]6 ^3 Y/ x
& d4 E# Z9 u+ s
你好，感谢关注！我使用过的试剂是：+ E  K# x! C: t# Q
Poly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)1 }) q8 {1 {% d; |
Poly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957)
, d$ B- z6 g% d0 k( \3 e+ MFibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)
; ~# g5 O7 A' u6 x以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？  s! v: P; c# \9 h! L( G( ~( w. C

& U/ o. N/ c8 h, bLaminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)
% d/ a9 S. c6 s+ y/ u. x这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。
: p. m5 _! J- g. q2 \4 P" IGelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)3 q0 r4 `& S+ b6 J/ p
这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。
: X+ I& Q; Y0 h0 Z+ ?8 Z# y, q
  l' w3 k! [* \" z请大家讨论一下，到底怎么样是最好？

karinahui

回复 jojomayer 的帖子7 A. u( U' z! q: r& g0 R
( }3 P, E! I8 [9 P
试试 laminin或PLL等37度或室温包被过夜？或者换别个牌子的增强粘附的chamber slide，如Nunc的一款。我也没试过，仅供参考。

jojomayer

回复 karinahui 的帖子
$ R4 o1 C9 i% q% @' \0 O
2 c+ J2 i# R/ P0 [3 U" M5 @$ h' m7 w感谢，完了我再试试别的chamber slide# X. V! T$ [' @; E: W5 y7 W- x
不过在我曾经觉得一款塑料质地的chamber slide效果比较好的时候，我的小老板曾经说过一次：貌似有人说塑料的chamber slide容易产生假阳性结果？谁听过这个说法？有什么根据吗？我小老板说的时候只是说听人家说~~~呵呵