PBMC掺杂红细胞会如何

easternliu

在吸白膜层的时候吸入过多的红细胞，在培养的过程中会遇到什么样的情况呢？因为脐血红细胞很轻，比较难彻底的分离，有时会掺杂较多的红细胞，大家遇到过没有

jianglei_sd

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! N% P+ b6 b8 z1 o# R能搞到是那种溶液吗？

weijunning

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: s! H, K8 }+ ]$ B
掺杂红细胞一般会影响白细胞生长，由于一开始红细胞比较强壮，白细胞相对薄弱，你可以尝试分血当天先用少量红细胞裂解液进行裂解；培养4天左右或更一些时间（6天），可以将细胞离心收下来，用比第一次量多的红细胞裂解液进行深度裂解，这时候红细胞相对比较脆弱，裂解效果比第一次要好很多，同时白细胞的数量也有所增加变得相对强壮些，裂解液对其影响会减弱，如果一次裂解不太好，可以再次裂解。我都是这么做的，裂解效果不错，细胞长得也很好。

刘艳85

若红细胞过多，影响在显微镜下的观察效果，之后的培养效果也会很差；可以用FICOLL在提取MNC时再分离一遍或是用红细胞裂解液将其裂解，这样虽然会增加操作步骤，但是会有有利于PBMC的培养

aochongyu

这个一般没有关系，培养一段时i间，通过不也换液基本上红细胞就越来越少的

aaronbct

补充资料, 在新加玻一所大学内有一学者做了一个研究, 发现在Wharton JELLY 内培养细胞时,  如果有一些红细胞, 在培养过程中有球捐出了血红素, 会影响细胞附在JELLY 上吸收养份. 这样的细胞活性会很低.. e  u$ M. ?$ t7 R" c

7 |7 e/ W: ]& ~4 T所以他用了两个方法: 一个是: 用一台离心机加FICOL 来分离, 另一个是加美国产的一种溶液, 把红细胞压机降到10 两种成效也不错.

aaronbct

I also add Ficol for Red cell depletion. that only remain less than 1% of red cell.
- [: H( c3 A: ~0 W$ n8 A

kangyi08321

FICOLL分离比较好的话一般不会参杂很多红细胞，对于楼上所说的血液粘稠度对分离的影响来说，只要不是太稠的话，影响不是很大！个人做分离很多次，分离不好的原因我发现的有这个，所有15 ml离心管分离的话，最好FICOLL和血液的整个体积不要超过10 ml，50 ml离心管处理的话最好不要超过30-35 ml，一般都能得到好的离心效果。还一个如果血液粘稠度比较高的话，血液加在ficoll液面层上不要分层太好，也对后面离心后，白膜层上残留尽可能少的红细胞有一定帮助，但是相对白膜层液面会厚很多（但不是细胞多啊，就是变稀了而已），后面有肯能需要吸更多液体了。1500-2000rpm ，15 min我都用过，差不多。离心机平稳点更好。有空上传下以前我离心的照片，希望对大家有帮助，不对之处，敬请指正。最后希望版主给点包包下载点东西看看。。。。HOHOHO

wenwen1228

正确操作不会掺杂太多红细胞。，就算有对细胞培养影响不大。因为加的因子都是刺激淋巴细胞分裂增殖的，红细胞几乎不增殖。

jingjing6837

红细胞多，可以用离心去除一部分，把转数调低一些，只把单核离下来就好，最好不用裂解液对细胞有损伤，要是去不净在用