CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

lyj-0017

CIK细胞起始阶段生长良好，细胞集落较多，但是在加液之后，细胞集落变大，并且聚团较大且有部分集落贴壁，后续培养过程中便会发现培养袋中出现絮状物，以至于后续培养过程中一直存在絮状物，细胞也死亡较多，不知道大家有没有遇到过这种情况？是我加液的问题还是别的什么原因导致的呢？

jenvy121

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  r/ M9 O% H* w) l
直接采外周血，数量也是因人而异吧

lyj-0017

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# l0 f1 X6 C! e/ T& Q* u+ a5 u
. K/ ~4 f: }9 L0 \& ~! W你们用的是机采吗？还是直接采外周血？现在培养一次最多能获得多少细胞呢？

jenvy121

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% i4 B3 Y8 U# W: F/ a- G$ s0 d5 ^2 z" v1 i, A# h% T8 J
对的，我们每次换液计算好用的培养基的量，然后预热

lyj-0017

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$ @" |% m; j4 h4 S# V培养体系得看分离得到的单个核细胞数量，根据5~10X10^5/ml的细胞密度铺袋。你后面说的预热多少没看懂，应该是问预热多少培养基吧？一般预热一瓶培养基，培养基手感不那么凉即可添加。酸碱失衡我觉得不可避免，但是不会出现太大失衡~

jenvy121

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* C1 R. q& g* k, k8 n) M
/ x& w" u+ f  k3 {/ f+ w6 X7 Q不知你们的培养体系有多大？一般用多少预热多少，而且预热的时间也不长，不会出现很大的酸碱失衡吧

sunny.yc

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* Y  y# L( f7 H, s0 z  l/ K$ D5 Y& f$ y* @9 r) o6 }
可能我了解得还太少，持续加干扰素还是第一次听到，试试看吧！

lyj-0017

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0 Q, V* r# X6 R
+ x  @; i" s6 r3 q6 Y' S: B$ y最近看文献看到有这么做的，D0天添加IFN-r和anti-CD3 mAb,第二天添加IL-2，后续培养以IFN-r和IL-2维持，按文献所说扩增倍数还挺高的~

sunny.yc

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+ B! \* M9 Z7 q. G: _
+ Y5 E2 h4 U) t1 P: M+ s7 R$ ]* d建议还是分开加，挺多文献都有这样的描述，而且理论看起来都很合理的" l& P: v2 `; p8 R8 ?) T+ J
" c! S' z0 Z9 W7 p7 h" m% _
如果你还是在纠结的话，建议你连续做几个平行实验看看，可能对于你的培养体系来说，D0加一种或加三种影响不大呢

lyj-0017

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; ]7 C1 E% O% V6 t' |: B0 V% b4 R% W& a/ D- L) ]. b; z3 i
记错了，IFN-r应该是1000U/ml。现在纠结的问题就是到底可不可以D0天三种细胞因子同时加？与传统工艺效果哪个更好一些。。。