CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子3 |8 {1 D) H8 ]$ H; J* P/ P
2 N" B! q& X; {, X" M, B- F
你的量是从哪看到的，都太高了吧，试试1000单位的干扰素γ，D0天一般只加干扰素

sunny.yc

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你的量是从哪看到的，都太高了吧，试试1000单位的干扰素γ，D0天一般只加干扰素

lyj-0017

回复 刘艳85 的帖子# ?, n4 o% J# c  [
  b6 B6 l% w. a+ H' D. @) C
用的是AIM-V ，如果是细胞密度过高的话，你认为培养袋中的细胞密度应该为多少比较合适呢？现在就是一直在找集落聚团的原因，你们以前遇到过这种情况吗？是如何解决的呢？

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子1 l; ]( }: f* v- K4 F; e3 Y- f$ H

. J) k0 T" Z* ]2 z另外一个就是IFN-r，这个应该如何加呢？是在加抗CD3抗体前24小时加，还是制备当天与抗CD3抗体一同加入呢？加入的浓度应该多少呢？2000U/ml算高还是低呢？

刘艳85

请问你用的是什么培养基？这个不是细菌污染，是不是细胞密度过高得不到营养而死亡导致的问题呢？

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子3 |+ P! Z: d# z% _3 Y
' l& C" `# H: n% `+ I
IL-2基本上都是用临床级的，试剂级的太贵了
. o+ m8 ?; _6 {! O4 h& l2 lIL-2你先试一下1000吧，基本上都是这个使用量的
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CD3单抗也不算高，如果你只是前期加，100ng/ml 应该问题不大，我做的培养体系也是这个浓度，基本上没有什么问题

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子/ g: G. r6 |  m2 c% D
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我们用的IL-2是国产的临床注射级别的，国产的一般效价一般都比较低一些吧，你们用的是国产还是进口的IL-2呢？国产的用2000也算高的了吗？4 c$ Z# \( r" L! h
anti-CD3单抗只是前期加，后期也是不加的。1 c3 R* _# g- G8 q" t5 M) I
目前来看，可能就是这两种因子的浓度过高吧

sunny.yc

回复 sunny.yc 的帖子) t) Y( y. E: y* O; L
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还有就是，CD3单抗也只是前期才用到，所以，对于之后的扩增影响不是太大，而且单抗一般都是作为前期一次刺激就可以了9 ^4 w7 k& b/ h% x) L; C
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你不会一直在添加单抗吧，呵呵

sunny.yc

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你试一下100ng/ml和1000U/ml吧，2000U/ml的IL-2实在是有点高了，大多都是300U到1000U，2000U我也是第一次听说2 S, g; U2 M2 e5 d9 T0 P
, v0 O# D) d$ U: H0 d' W2 |5 V1 T
不过，如果你现在才更改浓度，对于这份细胞来说，我觉得意义已经不大了，不过在对以后的实验肯定是有帮助的，2000U/ml，有点太高了

lyj-0017

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1 J' r8 S: i! r  W% l预热这个问题，我发现水浴应该是比放在培养箱中要好一些，至少培养基pH值没发现有什么明显变化。你说的培养基瓶也可能将细菌带入培养箱中不是没有可能，应该注意！2 s+ w7 ?6 `) n+ G- L

; e0 f  E! i5 T( D" ~/ ^对于CIK的扩增来讲，anti-CD3单抗和IL-2是必需的，IFN-r和IL-1可增强CIK的细胞裂解毒性。所以我认为出问题的可能是前二者，不知道你们用的终浓度是多少呢，我们的分别是100ng/ml和2000U/ml，你觉得浓度高吗？