CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子6 r: r' w  y% P: W+ {. _3 O
5 s  _0 |& M0 w+ X0 h
如果实验室有HH-1的水浴锅，那1L的培养基瓶子正好可以放进去，培养箱不太好，因为培养基瓶子也不一定干净，你不能保证你的冰箱就完全无菌吧，如果带进培养箱反而不好，弄不好污染了培养箱里的细胞，而且水浴锅水导热也比空气快，所以还是水浴锅吧。; W% C- m" w: s* A: k
培养基变紫这个问题，在培养箱或水浴锅都是一样的，因为你都是瓶盖拧上的，所以，没啥区别，再说培养基也是个缓冲体系，酸碱度变化不会很大的。0 L* E! T( `7 G. B) s- F. n
5 ]  |; {- Q% h6 ^% }! Z
还有，我觉得，有可能是IL-2，最近翻了一下Rosenberg主编的《癌症生物治疗——原理与实践》，里面有几句话对IL-2的描述是这样的——鼠剔除IL-2后，可使T细胞过度且无法控制地增值，因而提示IL-2不是T细胞在体内生长的必须因子，而是T细胞凋亡所必需。

lyj-0017

上两张图片，大家看看再分析一下

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子
7 c/ `3 P* r, P) q- \1 a
4 \3 @" C( o2 |' N/ y我现在也怀疑是细胞因子的问题，可能对于有的病人过高，因为前面的病人养得也还是不错的，你认为哪种因子的浓度过高会对细胞不利呢？IFN-r? OKT3?抑或是IL-2？
7 O, {. G! w" X% \8 }# z  @0 y培养基预热这个问题，我赞同你的说法，但是，我发现，将培养基放在孵箱中预热，培养基颜色会变紫，这是否意味着培养基pH值偏碱了呢？这时，培养基温度倒是提高了，但是pH值也同样升高了，这对细胞也同样不利吧？8 J% y0 f  ~9 m
用水浴是不是会更好一些呢？

lyj-0017

回复 流泪的鱼 的帖子7 g/ x3 A6 p- j2 }2 P& C

1 r8 |3 [% a/ z0 g% b2 a" p现在来看的话，可以排除污染，我还是能够分辨清楚是否发生污染的。
+ J( `2 v3 \7 m) Q! v& v所以现在认为是细胞死亡，具体原因还需要进一步排查。培养基一直是没有改变，CO2和孵箱温度也不会有问题；至于别的不当操作嘛，我现在认为有两种可能，一个是培养基温度，一个是添加的细胞因子浓度，还有别的因素不？请帮忙提供参考一下，多谢啦~

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子
! D6 `) x+ A2 Z; n- Y: I- P# ~' [* a% V/ P+ m$ X
一个解释是，细胞受细胞因子刺激过度，有些患者的细胞不太能耐受细胞因子刺激2 O! ~% y7 H6 ~8 O2 [% }9 n
还一个解释是，自体血浆没有灭活: J* w8 @% P$ G! w& X  I- n  F1 E

2 Q; u! D# Z7 F还有，培养基预热的话，可以扔培养箱也可以水浴，不过我不太建议用37℃，25℃就可以，我个人的经验是觉得37℃对培养基里的成分损失比较大
- t6 v4 x. k* c+ g& B- d7 H
$ w; ]0 T$ {$ ^. d7 X以上都是个人意见，望有高手点评

lyj-0017

回复 三月桂花香 的帖子1 l- g( A; S3 t

, L! ?  c& K/ S4 U# }1 g不像被污染的样子啊，等我上图

流泪的鱼

先排除污染，如果倒置相差显微镜下观察团块是树枝状的，就是真菌污染。培养基是第二天变黄，非常黄就是细菌污染。也可以去培养液送到医院的检验科，做细菌培养和真菌培养。& ^4 K; x" m* E
如果不是污染，就是死细胞，死细胞会释放DNA，缠绕其他细胞，形成团块。那么，在判断细胞是如何死的。是不是操作不当？是不是换了新牌子培养基？是不是温度和CO2的问题？细节很多，你要一一排除。

lyj-0017

回复 jenvy121 的帖子: a7 q' I: m3 C4 Q
1 `& g% Q, g/ B; p7 f
我们用的是无血清培养基，培养基在使用之前是放在室温下平衡，但是室内是开的空调，温度也就23度，我也怀疑是温度的问题。
. _- t) U" i# L' Y0 c0 W) b! {至于你说的预热培养基，应该是放在37度孵箱中还是37度水浴中呢？我曾经把培养基放在37度孵箱中，但是拿出来之后发现培养基颜色太紫，应该就是培养基pH值偏碱了吧，这样也会对细胞生长不利吧？不知道你们是如何预热的呢？

三月桂花香

操作过程中是否被污染了？或者你的 培养基是否被污染，絮状物是不是真菌类污染可能性大》？

jenvy121

你的液体是否为无血清培养体系？如加了血浆，血浆是否灭活？血浆里面未灭活的补体可能会对细胞的生产产生此类作用。. K% b+ t* x1 b( l  s
如是无血清培养体系，那么培养液使用前是否预热，会不会是低温产生的应激导致细胞出现此类状况。