谁有悬浮细胞球培养经验

Leipzig

悬浮细胞一般怎么换液，离心多少比较好，传代是要吹打很多次把细胞球打碎吗？多谢

妖妖空

这些基本的东西，实验室师兄师姐都会给你讲的吧，传代是要看细胞的密度的，所以细胞是要计数的，一般都是1传2的，很简单的，操作时候注意不要污染就可以了。

Leipzig

妖妖空 发表于 2013-7-30 20:53 $ f) b7 V+ J. a- l$ w& L
这些基本的东西，实验室师兄师姐都会给你讲的吧，传代是要看细胞的密度的，所以细胞是要计数的，一般都是1传 ...

* ~7 l! R7 q/ x7 N4 n! O) B( Y. g多谢啊我们这里就我自己做悬浮细胞，细胞球怎么计数？

妖妖空

回复 Leipzig 的帖子9 [: u, H" x1 a) C6 K% R
  y7 N  O, s, V
一般实验室都是血球板计数的，就是自己稀释后数细胞，现在有自动的计数仪器，要是自己做的话，你可以查下文献什么的，看下这种细胞的培养方法，如培养的条件和所用的培养基等。

wbj1983

回复 Leipzig 的帖子
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不知道你是培养什么细胞，不同的细胞接种密度是不同的，大部分细胞在悬浮培养的时候会形成细胞团——EB，换液只要小心点就可以了。

fengjh100

悬浮细胞球大多培养的是干细胞，不同的干细胞处理方式有所区别，假如是肿瘤干细胞（CSCs），那么采用血清剥夺法培养时在成球前一般需要换1-2次液体，3-4d换一次；此后，在球体初步形成时，就不要换液了，加液即可，加液到一定程度，感觉培养基中背景较深或细胞需要传代时，就需要离心，一般采用纯化、离心、消化、吹打等步骤，离心可以采用500转/3min。记住，消化细胞球体要重视，不然细胞状态不好。另外，吹打30-50次之间合适。不知我回答是否满意。如培养神经元干细胞，心肌干细胞等，那么处理方式又有不同。
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Leipzig

fengjh100 发表于 2013-8-1 11:00   k* i+ _; X( I
悬浮细胞球大多培养的是干细胞，不同的干细胞处理方式有所区别，假如是肿瘤干细胞（CSCs），那么采用血清剥 ...

; f5 V+ i9 e) d太谢谢你了，对我很有帮助

fengjh100

甭客气，都是同道中人，望多交流。

Leipzig

fengjh100 发表于 2013-8-3 12:29 " g  s. y/ ~+ C9 |( Q
甭客气，都是同道中人，望多交流。

/ a0 k1 `( n9 z5 n+ f
真是个好心人，我还有个问题，悬浮细胞长到多少密度或者大小就要传代呢？先谢谢了！

fengjh100

因为是悬浮细胞，不能凭空评定多少细胞数量，看密度只能靠经验和感觉，比如加了有6-8ml的培养液了，里面细胞球团也分布不少了（要根据细胞分布的空间密度），差不多每个高倍视野有10个以上的球团了。那么就可以传代培养了。当然如有自动计数器就更方便了，虽然麻烦些，但计数更精确些，一瓶细胞假如是T15的，个人感觉200-300万即可传代。大瓶的迭加数量吧。希望我的经验能帮到你。