转染率问题

lmh_yixue

我们请公司包装了慢病毒做A细胞的转染，发现第5天就出现了克隆样细胞，目前第11天，克隆已经很大了，想知道如何计算一下这种细胞的转染率是多少？是否有意义？比如我们转染了4*105个细胞，以1:10转染，最后获得的iPS细胞微2*105个，那么转染率是否是50%？还是用绿色荧光蛋白来算呢？
- |7 J; A* B+ I. m谢谢！

sun_happone

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3 ?( E; `6 z- e; [# F
* Y7 O: \; p# }- Ko ,谢谢，学习了

neuralstem

) N5 G3 N/ ?; A* w1 u( I

9 f& H+ {& |+ h8 O3 R回复 sun_happone 的帖子
2 N6 E- _/ u! L5 x5 F% Y; ], V/ e) q
用未转染的细胞做对照是不对的。 lentivirus有毒性。 未接触lentivirus的细胞当然状态好， 数量多。 : C5 D7 @+ Y& q0 X& ?8 h, I+ [

) n% t% w9 P; C4 x正确的方法应该是用control lentivirus（比如空载体）做对照。 不过我觉得不用， 直接用lenti-GFP转， 然后看有百分之多少的细胞表达GFP就可以了。

neuralstem

回复 lmh_yixue 的帖子
* N- Y. s6 U1 z# Y& q, |4 q8 I4 Q- l& H$ Q
No....转染细胞过程中， 有细胞死亡， 也有细胞繁殖， 所以不能简单的用positive cell number/beginning cell number来算转染率。 4 Q# I) w; }" `# S: S6 z5 o3 T" J0 \/ ]

! M) z5 \4 ]) y) h1 E正确的方法应该是看转染也后有多少百分比的细胞表达报告基因（GFP). 方法用flow cytometry。 如果细胞不能trypsinize的话，就需要在confocal microscopy然后镜下数细胞了。
( R& v8 D* s% y7 V/ C$ ?
! N8 q4 ~* s) D4 @3 ]如果直接看看不到的话， 建议用抗体染一下。 5 v- _' h$ @1 z: ]# V2 D# M: y

sun_happone

应该是用绿荧光蛋白来算，可以通过流式检测，以没有经过慢病毒转染的细胞作为阴性对照。

lmh_yixue

回复 limeiying 的帖子4 A, B5 R2 V- ^3 T  @) [1 c. ]

1 O  M0 @6 O; W& sMOI值，即细胞数目：病毒数目=1:10

limeiying

1:10具体指什么呢？转染前细胞数量：（病毒滴度×病毒体积）=1：10？