转染率问题

lmh_yixue

我们请公司包装了慢病毒做A细胞的转染，发现第5天就出现了克隆样细胞，目前第11天，克隆已经很大了，想知道如何计算一下这种细胞的转染率是多少？是否有意义？比如我们转染了4*105个细胞，以1:10转染，最后获得的iPS细胞微2*105个，那么转染率是否是50%？还是用绿色荧光蛋白来算呢？5 M& W4 @& e6 s8 T3 L
谢谢！

sun_happone

回复 neuralstem 的帖子. I. n: Y1 m2 a, `% ?% G
: c/ s6 D+ g( x0 ?
o ,谢谢，学习了

neuralstem

! W/ y# X2 c* f, t4 A2 n
. f% h: J7 C% J3 @7 D( s
回复 sun_happone 的帖子
5 M; C3 O; _3 E( N2 V, w1 x- {5 |9 M* o( g2 G
用未转染的细胞做对照是不对的。 lentivirus有毒性。 未接触lentivirus的细胞当然状态好， 数量多。
  X& I. Q  Q- ]; h
/ ]! ~) Y7 X9 @1 J. u7 A正确的方法应该是用control lentivirus（比如空载体）做对照。 不过我觉得不用， 直接用lenti-GFP转， 然后看有百分之多少的细胞表达GFP就可以了。

neuralstem

回复 lmh_yixue 的帖子! M/ P; M3 i1 U$ @7 b# `

# t- z1 I" W& G( X# ?' fNo....转染细胞过程中， 有细胞死亡， 也有细胞繁殖， 所以不能简单的用positive cell number/beginning cell number来算转染率。 6 M7 Y8 T* M& w
+ h/ i8 `3 {1 i; K) {) L
正确的方法应该是看转染也后有多少百分比的细胞表达报告基因（GFP). 方法用flow cytometry。 如果细胞不能trypsinize的话，就需要在confocal microscopy然后镜下数细胞了。
' v2 g/ F. ]7 G- ~5 x# y: g
- ]4 ~5 l1 q- H: `如果直接看看不到的话， 建议用抗体染一下。
# A( v; y$ ~) Y) z( }# a2 H( n

sun_happone

应该是用绿荧光蛋白来算，可以通过流式检测，以没有经过慢病毒转染的细胞作为阴性对照。

lmh_yixue

回复 limeiying 的帖子
7 z9 _, k6 i8 e. z
6 R# M- b2 ^& U  M2 qMOI值，即细胞数目：病毒数目=1:10

limeiying

1:10具体指什么呢？转染前细胞数量：（病毒滴度×病毒体积）=1：10？