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转染率问题 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2013-8-11 18:04 |只看该作者 |正序浏览 |打印
我们请公司包装了慢病毒做A细胞的转染,发现第5天就出现了克隆样细胞,目前第11天,克隆已经很大了,想知道如何计算一下这种细胞的转染率是多少?是否有意义?比如我们转染了4*105个细胞,以1:10转染,最后获得的iPS细胞微2*105个,那么转染率是否是50%?还是用绿色荧光蛋白来算呢?
- |7 J; A* B+ I. m谢谢!
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7
发表于 2013-9-12 14:06 |只看该作者
回复 neuralstem 的帖子
3 ?( E; `6 z- e; [# F
* Y7 O: \; p# }- Ko ,谢谢,学习了

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地板
发表于 2013-9-12 02:44 |只看该作者
本帖最后由 neuralstem 于 2013-9-12 02:45 编辑 ) N5 G3 N/ ?; A* w1 u( I

9 f& H+ {& |+ h8 O3 R回复 sun_happone 的帖子
2 N6 E- _/ u! L5 x5 F% Y; ], V/ e) q
用未转染的细胞做对照是不对的。 lentivirus有毒性。 未接触lentivirus的细胞当然状态好, 数量多。 : C5 D7 @+ Y& q0 X& ?8 h, I+ [

) n% t% w9 P; C4 x正确的方法应该是用control lentivirus(比如空载体)做对照。 不过我觉得不用, 直接用lenti-GFP转, 然后看有百分之多少的细胞表达GFP就可以了。
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报纸
发表于 2013-9-12 02:42 |只看该作者
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回复 lmh_yixue 的帖子
* N- Y. s6 U1 z# Y& q, |4 q8 I4 Q- l& H$ Q
No....转染细胞过程中, 有细胞死亡, 也有细胞繁殖, 所以不能简单的用positive cell number/beginning cell number来算转染率。 4 Q# I) w; }" `# S: S6 z5 o3 T" J0 \/ ]

! M) z5 \4 ]) y) h1 E正确的方法应该是看转染也后有多少百分比的细胞表达报告基因(GFP). 方法用flow cytometry。 如果细胞不能trypsinize的话,就需要在confocal microscopy然后镜下数细胞了。
( R& v8 D* s% y7 V/ C$ ?
! N8 q4 ~* s) D4 @3 ]如果直接看看不到的话, 建议用抗体染一下。 5 v- _' h$ @1 z: ]# V2 D# M: y
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板凳
发表于 2013-9-2 15:23 |只看该作者
应该是用绿荧光蛋白来算,可以通过流式检测,以没有经过慢病毒转染的细胞作为阴性对照。
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藤椅
发表于 2013-8-12 13:42 |只看该作者
回复 limeiying 的帖子4 A, B5 R2 V- ^3 T  @) [1 c. ]

1 O  M0 @6 O; W& sMOI值,即细胞数目:病毒数目=1:10
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沙发
发表于 2013-8-11 21:19 |只看该作者
1:10具体指什么呢?转染前细胞数量:(病毒滴度×病毒体积)=1:10?
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