转染率问题

lmh_yixue

我们请公司包装了慢病毒做A细胞的转染，发现第5天就出现了克隆样细胞，目前第11天，克隆已经很大了，想知道如何计算一下这种细胞的转染率是多少？是否有意义？比如我们转染了4*105个细胞，以1:10转染，最后获得的iPS细胞微2*105个，那么转染率是否是50%？还是用绿色荧光蛋白来算呢？+ Y$ j: u% O5 T% x# D" d
谢谢！

limeiying

1:10具体指什么呢？转染前细胞数量：（病毒滴度×病毒体积）=1：10？

lmh_yixue

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4 ~0 C4 S0 X& M% Y, \# cMOI值，即细胞数目：病毒数目=1:10

sun_happone

应该是用绿荧光蛋白来算，可以通过流式检测，以没有经过慢病毒转染的细胞作为阴性对照。

neuralstem

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  ?7 e2 m) X0 f# ?$ _( [* s' c3 s) M! E: I2 s. o* g5 a7 L% L" H
No....转染细胞过程中， 有细胞死亡， 也有细胞繁殖， 所以不能简单的用positive cell number/beginning cell number来算转染率。 - m* H! k- n$ a4 |0 w

8 E& @1 M% }0 \; K正确的方法应该是看转染也后有多少百分比的细胞表达报告基因（GFP). 方法用flow cytometry。 如果细胞不能trypsinize的话，就需要在confocal microscopy然后镜下数细胞了。 % U& G* ~9 K# D

+ f5 x2 O  D0 h5 C' Q( b% Z如果直接看看不到的话， 建议用抗体染一下。 + H2 J/ A! _  R$ \8 q0 h$ Y: q4 N+ M

neuralstem

$ h) }5 H5 `' J' i, f% |% ~' W- c: ?7 E
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' K  Q4 S0 J+ r' t7 |5 s0 K$ [& D, w1 f( S, b% s5 ?
用未转染的细胞做对照是不对的。 lentivirus有毒性。 未接触lentivirus的细胞当然状态好， 数量多。 3 P4 Z' q5 H5 D8 U3 E6 D9 o+ c3 i
- B; Q6 T) a6 a9 `% W( T
正确的方法应该是用control lentivirus（比如空载体）做对照。 不过我觉得不用， 直接用lenti-GFP转， 然后看有百分之多少的细胞表达GFP就可以了。

sun_happone

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o ,谢谢，学习了