关于细胞质蛋白提取

innatestem

1.看你用的是什么细胞，有些细胞很容易轻轻吹打下来，比如293T cells。有些细胞则需要消化下来。
  n3 @/ G  X. F; G+ R+ d" |2.用PBS洗一次就可以啦, c- M) h7 {) ~4 j  u- K5 ^+ `
3.你用的裂解液建议最好在冰上预冷少许片刻。
2 ^/ O  z5 q+ _0 Z5 j0 d4.裂解液中要加蛋白酶抑制剂PMSF,NaF,Leu，Pepsin等，如果你涉及到磷酸化修饰相关的检测时，最好再加些NaF，NaVO3，Na2PO4等磷酸酶抑制剂。5 r( Q* t, l3 r
5.再进行简单的超声破碎，离心，取上清。
( _2 u' @0 G* k% P9 G6.其实还有一种方法时获取细胞全蛋白的提取物，就是用2x sample buffer 直接加到你的细胞中，然后95度，5分钟。再进行简单的超声。如果你的蛋白很难检测到，上样跑胶时多上点样品。
4 G7 B1 U) d& ^/ z% V7.祝好运