western blot出现这种结果是什么原因？谢谢

daviddow

最近的试验western blot出现了这样的结果。大家帮我看看是什么原因？谢谢
4 O1 w, t% n" e  r1：是不是裂解的时候过长？
7 N/ `9 C' Y  [, o/ O& Y8 I2：是不是SDS-PAGE电泳的时候电泳液出现了问题？

daiying5200000

曝光没弄好吧

app_1983

不知道你的实验条件是怎样的，一抗是单克隆抗体还是多克隆抗体，单从这张片子看起来的话，感觉跟电泳液的关系不大，像是封闭过程没做好，出现了非特异条带及背景；另外你想要的是哪条条带呢，如果是想要上面的条带，而不是最下面较黑的条带的话，那就有可能裂解的时间过长，导致蛋白降解较多。

innatestem

1.能不能说一下你的裂解条件？3 `' C3 X- E! P% z) A
2.可能与你的转膜条件有关，你用的是干转还是湿转？6 W6 @; `, N' f1 \2 f) K+ i
3.有可能是你的一抗浓度不太合适。
' C# U/ A6 M+ g4.用PBST/TBST多洗一两次。# z3 E% z4 _4 w: \7 R. y( ?
5.曝光的时候控制一下曝光的时间

jackywangzr

由于不知道你的试验条件，不好判断。1 W& z2 m+ W& K5 c$ m9 r1 _
但是出现这样的条带是不是你用的是多抗啊？？特异性太差。3 u7 ?1 u& m3 J5 K  u* e
如果以前做过的话建议洗的时候加长时间，加大次数，效果会很好的。

susuloveq

应该是胶没配好

meister

回复 daviddow 的帖子  }  X& e  F2 ], e, l( \" d

% d; B8 Z! H# K, Z9 z+ D2 x; d应该不是抗体的问题，也不是胶的问题。
1 j, y+ k4 w) G
+ V% T, O8 t' {; g  f我估计最大可能是蛋白样本制备的问题。有可能蛋白浓度过高，或者DNA裂解不完全。

懵懂干细胞

2013-9-29 19:02 上传

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你看我的也出现这种情况，开始我没太在意，以为下次蛋白制备，制胶和电泳等严格点就会OK，结果又出现了，' |! ^0 `3 q" z% k" h2 M& @2 y
我现在怀疑的原因有两个，第一：是蛋白浓度过高，第二：是裂解时间或者强度有点过了！( |3 d' U) G7 y" x8 d
我准备重新提取下蛋白试一试！ 如果哪个高手遇到此种情况，还望赐教解决方案，省走弯路！

懵懂干细胞

http://emuch.net/html/201010/2445729.html 这是小木虫的一个战友求助的帖子 出现的问题可能差不多，可以参考下人家是怎么解决的. |0 C0 e* O6 A- d8 x
如下：% C9 I# B& [3 t3 `5 K5 ]
同志们，偶的问题解决了。- ?# S. W7 j; r* Q, u8 l3 h
1、偶重新配制了loading buffer；
6 p$ A* S" `' E' V7 j  w 2、裂解完细胞后取了部分上清做蛋白定量，然后立马加了等量loading buffer
$ K' P+ a$ a# l- c8 [  n 。以前偶都等定量结束才加的loading buffer；
3 n; c! [0 d- ?$ |* g% B0 b1 {2 p9 d 3、偶每次上样前，也有离心哦：
( F  s3 p) N4 U: H5 i1 s 4、一切程序一定要在冰上进行。

懵懂干细胞

顺便问一下：会不会是没浓缩好啊？