求猪SSC培养的操作步骤以及注意事项，不胜感激。

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我们做过猪，相对比小鼠的要难一些

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给你个流程吧：% V9 k; p9 S, d
1. 猪场采集的睾丸样品置于含3倍双抗pbs的离心管中（离心管与冰袋一起放置于盒子中），带回实验室，置于4度冰箱。
% s2 G1 o$ |3 B+ f2. 需要灭菌的东西：手术器械（5把小剪刀、2把大镊子、8把小镊子、2把手术刀柄、100目和200目的滤网各一个）、纱布、PBS、超纯水、离心管（1.5、15、50ml）、血清瓶、枪头、蓝盖瓶、小烧杯、玻璃皿、毛巾。
+ V3 a9 {! `- J" _3. 提前配制DMEM、双抗、PBS、胶原酶（2mg/ml）、胰酶（7mg/ml）。4 b. R. f6 Z4 u5 R# x$ [$ @  W! a
4. 取出采集的新鲜睾丸样品，在含3倍双抗PBS的50ml离心管中洗3次，转移到含75%酒精的50ml离心管中浸泡并不时摇晃5min，然后转移到含3倍双抗PBS的小烧杯中清洗后再转移至含PBS的另一小烧杯，如此再 重复1次（总共过3个小烧杯）。3 z3 e  P3 U) K, O) g
5. 将睾丸样品从最后一个小烧杯中转移至玻璃皿中，剪去外侧的浆膜，注意不要将白膜剪破。
* N( k4 [% V* A6 W6. 将睾丸样品在含3倍双抗PBS的玻璃皿中漂洗3次（依次过3个玻璃皿）后转移到一个新皿中，加入少量PBS，用镊子夹起手术刀片装在刀柄上并在酒精灯上灭菌，用PBS降温后剥离组织。
, [9 S5 M+ M. Q0 ?9 X: j' w7. 剥离后的组织在含3倍双抗PBS的玻璃皿中漂洗1次，转移至一个新皿，用剪刀剪取组织，不要剪到白色的结缔组织。用镊子将小块转移至含有胶原酶的50ml离心管中，封口胶封好，震荡数次后放入37度水浴锅消化。! I& \/ F' s0 N% W& A0 x7 a
8. 胶原酶消化，根据消化情况可先将已消化出的小管分出，剩余组织块继续消化。3 I5 r, u  f- l' ]+ i9 s, {
9. PBS洗4次除去血细胞，第3次洗时加入Dnase。  N. u1 k9 `9 T4 p+ s5 M) l( P# b
10. 胰酶消化并加入Dnase，严格控制消化时间，保证活率。: K% [4 G) W9 c* L
11. 血清终止消化，细胞悬液依次过100目和200目滤网。
$ C+ d7 `& l1 k) z8 R12. 离心，DMEM重悬，根据细胞数目接种至大皿，进行差异贴壁。$ k- Z. i3 _1 `  G7 _
13. 差异贴壁（15min-20min-25min-30min-35min-40min），接种的细胞数量和活力不同贴壁时间可有差异，若细胞贴壁情况不佳可延长贴壁时间，贴壁性原细胞过多可适度吹打。
; f$ X# w& B+ g' M; s( X: @; {14. 收集差异贴壁后的悬液，离心，PBS洗3次减少细菌数量，接种至含5%血清、2~3倍双抗的培养基中过夜。
" X* O: P( L& |/ N15. 第二天收集吹打和稀释10倍胰酶消化后的悬液，可得到高纯度的性原细胞，若支持细胞数量偏少，可在分出性原细胞后，用胰酶原液消化出少量贴壁的支持细胞。若仍可观察到细菌，再用PBS洗3次。: e+ [4 w. E5 I6 ^+ r, b1 {

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越小的越好吧

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的确是，这也是研究的一个瓶颈。但是采大猪的样不好采啊，人家都在7d以内就阉割了