胎盘间充干的产量有多少？谢谢

willow0711

做了几次，胎盘小叶分离间充干细胞，总是存在两个问题，污染和产量低。
4 ~/ ?0 ?9 N6 f5 B! C1、之前发贴请教各位大侠，我用含4种抗生素的PBS清洗，也用75%的酒精反复洗了3次，但是没什么改善，还是细菌污染了，无奈啊！不知道哪位做过的大侠可以分享下自己的经验呢？4 P' l5 J# n6 l7 r7 w
2、还有个问题就是产量极其低，想问下有经验的大侠，你们分离的时候，一般分离多少克？得到的细胞可以铺几个25T培养瓶？或是几个孔板的孔？谢谢了！

sdudai

同楼主，我也想问一下各位大侠，怎么避免污染问题，我做的胎盘小叶分离间充干细胞也是经常污染。

uslzhang

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5 t( J+ X0 s7 _( F1 p6 G3 N/ i: M  f6 Y  e7 h) @' [
楼主不是存在什么理论问题，而是操作过程的技术存在问题，建议练好手艺，严格操作，去其它实验室观摩别人成功的操作规范程度。

willow0711

回复 uslzhang 的帖子1 e$ |6 p- z% S( M: m+ n

) G; x3 h6 S, {# m哦，只是没有这样的实验室可以去观摩啊

cantonchn

5 H# J' z  q0 \6 e- h
0 n5 ~& m! d4 s$ d! R5 K3 |6 \胎盘提取MSC污染几率很大，远不如脐带。6 z- [" Q4 X) u/ a" m+ S

, T# Z; O& |; z. \$ |# k5 S并且胎盘中含有大量的前体MSC（即MSC的未成熟状态），这个东西个别公司称之为“亚全能干细胞”，目前尚无证据表明此干细胞与MSC有何本质的区别~~~

piano尤尤

所获取的胎盘本身来源的污染 这一点一定要尽量避免 如果开始就是无菌操作 那后续就基本不会有太大的问题
$ p1 t8 w2 j3 K% A4 D运输过程不要太长 取到标本后 封口运输+ a3 \9 \: K" I
我所做的胎盘基本上是从产妇生产到实验室就一个小时3 B/ z# Q5 Y. o7 i
清洗就只用双抗 没有用过酒精
6 L7 e7 ?8 I8 a5 x3 I做了几十次 就一次污染6 \0 H  x' N% X; H0 g
关于产量的话 你可以试试第一次消化贴壁的细胞的培养基 可以再次离心贴壁
: I$ G* `- C' |( e( G- [

单个核细胞

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- U/ E. V( _' T/ N7 X8 X4 v
7 r- v3 Y  w( l7 U* A/ w1 I& B胎盘放在加有双抗的采集液里，分离的时候剪取5-10ml，漂洗去除血凝块，剪碎后加入酶消化，过滤去除未消化的小块，滤液用Ficoll分离取白膜，洗涤白膜后接种培养。5ml胎盘小叶处理后所得原代细胞应该可以接种一个T25瓶。
% I2 h5 U" `2 x2 D* D( C: U3 H0 `# V
注意几点：
/ y/ @! U  y! `* K" G2 B/ l( C! \1.盛放胎盘的器具应首先做到无菌；
" C- ~8 X3 P' @% M, `2.采集液加入抗生素；& ?* p$ H' A1 A' t* t! m% {
3.分离操作所需的手术器械、一次性耗材、试剂均应保证无菌；1 S# J2 [+ V" H# i9 V( E
4.建议使用一次性细胞筛网；: C: a, w& {9 m' ?4 b% C* M( \
5.注意无菌操作。

willow0711

回复 piano尤尤 的帖子4 A9 p6 i/ r( }7 M8 h' Y2 D0 s. `
, r0 D& R: P0 f3 Y; U# x6 V
哦，谢谢; y* D8 o2 V9 k" i
每次都是人家装到袋子里面后给我们，不允许我们把无菌器皿带进产房！

willow0711

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$ |! I" J; p& r. f$ I2 J4 o8 H2 K8 G# I! n7 Q' U
恩，谢谢

cantonchn

回复 willow0711 的帖子1 q% Y( u) w$ t/ x$ a

: ~' i( j# L( V; J$ d/ j7 Y$ w那污染的可能性就大了~~
, g, @1 \/ c1 i  n