求助最近培养的人hESC特别容易分化，通常第3天就分化了

青鸟

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各位大神们，最近培养的人hESC特别容易分化，通常第3天就分化了，求教！: h$ G8 h& @5 ~$ p+ z$ B, [* r

青鸟

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我们的试剂一直很稳定，没有随意更改过，同求你们细胞选择的经验

青鸟

回复 waterbubble 的帖子9 D% W+ |, H) _
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我们一直是机械传代，求你们传代时细胞选择的经验

nichifanlema2

回复 青鸟 的帖子5 V$ Y; t+ \. e6 G; L! G- R

6 [+ U2 u6 q1 b  ]: T如果能提供图片更好解答一些。我觉得很可能是feeder密度的问题。

细胞海洋

回复 zxmflying 的帖子+ ~6 V- ~  J% a( X$ D; m
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看9楼

细胞海洋

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你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
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gzeb

细胞出现分化跟传代是否手工或机械没什么关系，主要是生长环境问题，你是最近几次培养出现过度分化吗？如果以前都没问题，而且你最近使用过的试剂、因子有所变动，就想想是否是这方面的问题，特别是血清和细胞因子

青鸟

我们现在用的就是三代以内的MEF，一直都是机械传代，没有用过酶传代。请教你们传代时挑选克隆的经验？

zxmflying

是不是培养基有问题？

wwy551

很可能是你用的MEF feeder不好，可以考虑重做原代MEF，传代不超过三代做feeder。
* L$ q. I( R: Z5 h1 ]# G: o! M提高现在培养ES用的培养液中的bFGF浓度，如果分化状况不是特别严重，传代ES之前在显微镜底下标记出来分化的克隆，挂掉。如果分化得很严重了，建议重新找来状态好的ES培养，一定要把MEF搞好。