大家给点意见，我用的0.25%胰酶不含EDTA，消了3min，MSC纹丝不动，拍打、吹打也不动

bishengrong2013

大家给点建议，这胰酶用之前已在孵箱内预热到37度了，我很苦闷

漫步云端0511

我是新手，不太明白，消化液里为什么不含EDTA？

piano尤尤

消化前培养基有清洗干净么？
& B( G. c+ T, o1 ~' F! y! T6 O4 k建议用商品化的胰酶

zhouyuchuan1990

1.胰酶消化前有用缓冲盐洗细胞吗，不洗的话剩余培养基中的蛋白质可与胰酶反应，降低胰酶的效率。
/ z/ q- I, p/ L$ N2 L2.胰酶的浓度可上调或者你胰酶的量有点少。
' Z/ p' j; S& \, X: h+ |3.为啥不加EDTA，加了EDTA可以中和二价金属离子，提高胰酶的作用。
, X7 E" {* ^& c5 U4 d3 o' f8 S4.消化时环境温度最好也能控制在37°，不然你环境温度低，即使胰酶预热到37°，胰酶的反应速率肯定不会高，我们实验室消化时都放在37°孵箱里。

孙帅帅

你还是用Gibco的胰酶吧  挺好用的；在消化之前先把培养瓶用生理盐水洗两遍；37℃培养箱中消化一分钟就ok了

bishengrong2013

回复 漫步云端0511 的帖子- f8 ^5 j, R# D) U" v

2 \8 b& {7 Y; a# Z消化前已经用pbs洗了2遍，细胞太坚挺了

bishengrong2013

回复 zhouyuchuan1990 的帖子8 ~( d  c% C+ {  V
  A9 Q7 [! s; G) I8 y8 Q
好的。谢谢

bishengrong2013

回复 孙帅帅 的帖子, h2 M& m9 A4 I7 d3 ?( x( d( f: T

+ F2 ]8 o& }3 n" T- v以前用过gibco的成品，感觉是细胞状态不好，可能是效果了，现在改回来吧，呵呵

沙漠狐o0

是哪一种细胞呢？

askage

; p4 C0 L2 U/ M, Y3 L$ x- S5 k
+ m/ `  c* j' |2 E: }
既然你PBS洗了两遍，那么可能的原因是胰酶失效了【多次预热的问题】。去买商品化的吧，1瓶500ml也才300多大洋。