求构建具有过表达基因+RNA干扰的慢病毒应用的文章

zhen022

问了一个生物公司，问是否可以构建一个可以同时表达某种蛋白质的基因和具有RNA干扰作用的小RNA，他们说不行。- n4 i8 c7 [5 K% `6 p
刚了解这方面，不知道有没有这方面的报道？这种构建方式是理论上本身就不行还是因为构建很难啊？

michaelgibh

你的意思是把它们构建到同一个载体上吗，理论上可行，实际很难，它们的启动子不同。

zhen022

回复 michaelgibh 的帖子, j9 ^: {8 _+ d( r4 }) i0 ]. v

3 O" H; W  J' m6 }& e嗯对啊，这种是不是启动子有各自的系统啊？那为何慢病毒上可以构建多个标记（这些不都是红色荧光蛋白，荧光素酶蛋白之类的啊）的基因呢

zhen022

ｕｐｕｐｕｐ

zhangweihwz

这是一个载体设计上的问题，完全是可以实现的。
7 `/ l) s  x6 O2 Y' i用于RNAi的载体上一般会带有筛选标记。将筛选标记换成自己需要表达的目的基因就行了。或者用IRES、2A将筛选标记和目的基因串联起来。同一载体上的H1 promoter 或者U6 promoter 后面仍旧可以插入shRNA。

zhen022

回复 zhangweihwz 的帖子
, G7 C6 F$ U/ D) d6 \( \/ _: W7 B0 A5 m( R( l- p1 @
求相关技术文献之类的，因为问了公司，都说比较苦难达到两种基因的同时表达！

zhangweihwz

Cas9 载体不就是这样的吗。一个载体上需要表达较大的cas9蛋白，同时还需要表达gRNA。看看cas9的文章就会明白的。

goodboy

回复 zhen022 的帖子
2 G" k0 U6 z$ i
' s: D8 K! O5 \, G6 R1 }. ~$ z; T# U; h完全没有问题，我们实验室一直在用此系统。好多文章都有报道的。

zhen022

回复 goodboy 的帖子; o4 i, F3 q  m; z
, h* ~* m- Q$ _
跪求几个相关文章，另外不知道你们做的效果基本如何。0 |) Z" Y5 R+ l, Y8 r- z
我是真心没找到针对性的文献。

goodboy

回复 zhen022 的帖子9 X, q2 Y) d2 J" j% E2 J
& B2 R0 s4 f6 \$ ~
在小鼠上可以成瘤