求构建具有过表达基因+RNA干扰的慢病毒应用的文章

zhen022

问了一个生物公司，问是否可以构建一个可以同时表达某种蛋白质的基因和具有RNA干扰作用的小RNA，他们说不行。
: z( _. X6 f) _: B) V( w刚了解这方面，不知道有没有这方面的报道？这种构建方式是理论上本身就不行还是因为构建很难啊？

goodboy

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4 z1 w- q3 D! r  L; U& Q) K" p5 y# P0 L9 [: C. K' k+ J! h' ?0 Z! H
在小鼠上可以成瘤

zhen022

回复 goodboy 的帖子, n' J6 m# b: f4 C6 s" q1 z, Z

: T# j* H: }2 V; T跪求几个相关文章，另外不知道你们做的效果基本如何。
- {+ s  Y5 z5 K% G" l我是真心没找到针对性的文献。

goodboy

回复 zhen022 的帖子4 \$ t6 z: y8 ?! }5 U

5 X0 Z0 y9 D2 X4 Z7 P2 D* p完全没有问题，我们实验室一直在用此系统。好多文章都有报道的。

zhangweihwz

Cas9 载体不就是这样的吗。一个载体上需要表达较大的cas9蛋白，同时还需要表达gRNA。看看cas9的文章就会明白的。

zhen022

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5 B' @8 M- c1 v% l8 r, R, b! t' E% Z6 m" n: ?
求相关技术文献之类的，因为问了公司，都说比较苦难达到两种基因的同时表达！

zhangweihwz

这是一个载体设计上的问题，完全是可以实现的。* [9 W9 }( h' P; T# o, i8 H
用于RNAi的载体上一般会带有筛选标记。将筛选标记换成自己需要表达的目的基因就行了。或者用IRES、2A将筛选标记和目的基因串联起来。同一载体上的H1 promoter 或者U6 promoter 后面仍旧可以插入shRNA。

zhen022

ｕｐｕｐｕｐ

zhen022

回复 michaelgibh 的帖子
& f5 A2 n7 n! o7 _' j5 x# l% l4 r$ H
+ j- C1 E+ e7 n$ K. I. b嗯对啊，这种是不是启动子有各自的系统啊？那为何慢病毒上可以构建多个标记（这些不都是红色荧光蛋白，荧光素酶蛋白之类的啊）的基因呢

michaelgibh

你的意思是把它们构建到同一个载体上吗，理论上可行，实际很难，它们的启动子不同。