脐带间充质干细胞CD73表达率

swtarron

细胞CD73的表达率一直偏低，低的时候只有30%左右，找不到原因，不知道各位同仁养的细胞的CD73表达率怎么样啊？

uslzhang

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$ `  d& T( M6 ?; |. _7 M如果你的细胞纯度足够纯的话，CD73达到95%以上不难。

xuyang0317

看你检测的是P几代了？还有你的分离方法，一般传代到P2时细胞就很纯了，我们这边是97%以上的，还有你传代时一定要换培养瓶，之前看见有人传代不换培养瓶的，有些杂细胞虽然不会扩增，但是。。。你懂的！

swtarron

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) g3 _. D8 S5 ?3 z检测的P1，传代的时候换瓶子了的，T75传T175的，分离就是分离华通氏胶，然后组织块贴壁培养。

swtarron

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3 {$ F4 j+ G0 I3 x/ R8 X! B检测的P1，传代的时候换瓶子了的，T75传T175的，分离就是分离华通氏胶，然后组织块贴壁培养。

2420527

CD73达到90%是比较困难的，一般会达到70%以上

xuyang0317

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那CD73也不应该那低啊？你P0低是必须的，但是到P1应该还是比较纯的，你培养时是多久换液？间充质长势怎么样？一般冻存的是P2还是P3？楼下的说CD73到达90%很困难？我们这边的标准都是98%到99%以上的，是我们的设备问题？我们只检测冻存前的流式的！

xuyang0317

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组织块贴壁法分离出的也有内表皮细胞，但是这些细胞在我们消化时很难消下来，即使消下来了，也不扩增，所以随着传代的次数增加，那些我们不需要的我们定义为杂细胞的贴壁生长细胞都会将下来的，不知道您做脐带间充质干细胞分离培养多久了？有没有SOP执行标准等，按理说CD73不会那低的，记得定期换液，我只能这样说了

lipd09@mails

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# ]( ]! Q8 _; n/ u+ S9 a* d有些时候，胰酶的消化也会对干细胞表面maker的表达率也会有影响。

fenglei@sc-l.co

1.细胞培养传代时细胞培养瓶不可以重复使用；
/ s; v! ^' g+ i2.细胞最好多传几代，我们检测一般在P3以后；
; y9 Y! y( E! q2 w3.流式检测是一定要先做对照，这个是必须的；
8 X/ K; q$ \5 T, t; }- c6 `4.抗体按照说明书使用，不要随意更改使用量；
: ]& v( I8 K. D* Y( |* l6 n! P5.上样前离心
, x- K. G  F5 k" A4 L8 u6.更换抗体，做一下对照。现在抗体投诉很多的。5 A+ c. z# s8 K4 U; Q