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CIK细胞培养,出现聚团贴壁!添加小牛血清出现絮状物体。 [复制链接]

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发表于 2013-11-28 14:13 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位朋友们好,小弟近来研究CIK细胞,用的是X-VIVO培养,接种了1-2*106浓度接种,出现大量的细胞克隆贴壁,生长了17天也没散下来,在前期生长较慢,补液间隔一般都在4天,到了15天细胞才长满了瓶底,不过也有大量的克隆集落贴在瓶底上长,一直没散,不知大家有没有遇到此类情况,在第6天添加1%的小牛血清,出现了絮状物,难道血清还有纤维蛋白?希望大家踊跃讨论!
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沙发
发表于 2013-11-28 20:54 |只看该作者
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9 Z' w" ?0 \% v5 a/ @6 n1 M: G$ [2 }" _0 R( Q0 K6 ^
首先,应该确定的是,细胞装瓶之前是否已经在培养瓶中进行了贴壁处理?4 t5 j. Q$ i$ p7 f8 r8 |3 J/ W! c
其次,一开始没有加血清,而是在第六天加血清才出现絮状物,不排除是血清中的纤维蛋白粘连细胞,也不能排除是死细胞聚集造成的,建议做个对照试验进行观察。
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藤椅
发表于 2013-11-29 10:35 |只看该作者
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5 N: G: }" m& ~+ \
( {1 g6 Y' B7 @( _; R- e; d用这个培养液不需要加血清的,一般贴壁是有的,只要不死没关系,一晃还是可以下来的。
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板凳
发表于 2013-11-29 14:05 |只看该作者
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回复 lyj-0017 的帖子
: }$ c" l; _0 m: w' o0 w. E  }5 X8 L- n4 v+ d
这次是分了两个浓度培养,一个是1*106,另一个是2*106,低浓度的贴壁的细胞团一直都没散下来,高浓度接种的到了15天慢慢的散下来,细胞增殖加快,细胞密度还行,长得比较圆亮,培养基也黄了许多,低浓度的细胞也有些增长,悬浮的细胞也比较圆亮,就是原来贴壁的团一直都没散,可能是在接种和前期没有添加自体血浆,细胞长得很慢,在15天左右才慢慢长起来,加了两次牛血清,第二天都出现絮状物,应该不是纤维蛋白的问题吧,牛血清是不含有纤维蛋白原,也咨询了技术支持,得到的结论是无血清培养基和牛血清不匹配,但不知道具体是那种原因5 Y/ V" _; s, C7 o  D0 o/ Q
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报纸
发表于 2013-11-29 14:06 |只看该作者
回复 luyue6453 的帖子
1 |( ~3 ]' ^5 z1 E7 z+ F, j& ]* Z. N( @/ _% [1 d
不加血清或者血浆,那细胞是长得很慢的

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地板
发表于 2013-11-29 16:58 |只看该作者
回复 大海之家 的帖子$ w$ b; C6 k+ n
2 m& S& J5 o" v3 z# Z0 o1 ?6 L
我们是培养前240ml加5%的自体血清,后面不加一样很快啊,一般15天就3000ml了,你如果加小牛血清出现絮状,你首先考虑加的血清量是不太大,第二这批血清有问题。一般加血浆超过1.5%就出现絮状了,以前加自体血浆经常这样很烦,后来就改了。
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发表于 2013-11-29 17:32 |只看该作者
回复 大海之家 的帖子
$ M) z# N5 s; w/ Z! c* Q# \) ~7 g5 c+ E9 g# F( E% J
所以细胞密度很重要,密度太低了细胞不容易长起来。如果按照技术支持的说法,无血清培养基与牛血清不匹配?估计不会是这个原因吧,可能是你加的血清浓度太高吧。我们以前加过人血白蛋白,对比了一下不加白蛋白的,最后培养的结果也没有发现什么大的差别。
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发表于 2013-12-3 10:52 |只看该作者
回复 luyue6453 的帖子$ w1 Z9 h& J0 c3 r- o
% F7 h0 x5 r, o% K4 G4 T
我添加的是1%小牛血清,在第6天第一次添加,第二天就有析出,之后又添加了一次,又析出了。你加的是自体血清?是不是经过灭活之后获得的?你讲的加1.5%血浆是不是指没有除去纤维蛋白的还是已经除去了纤维蛋白的?
6 l/ l; b4 s# y
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发表于 2013-12-3 10:54 |只看该作者
回复 lyj-0017 的帖子6 E' r/ C5 ~$ c) z
" t9 I9 y* |: {" _
是的,不过细胞接种密度合不合适还要看培养方法,像我的这种方法还是2*106每ml比较合适
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发表于 2014-3-29 23:04 |只看该作者
回复 大海之家 的帖子
" a4 F3 y2 N" g: u' K2 |; ^2 j4 X" |: K1 v0 ?3 g
你好,我最近也在培养CIK细胞,想问一下你这个细胞接种量是多少呢?我们之前有两份接种量比较少的都增殖很慢
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