不同大肠杆菌感受态的区别

weiyepan

DH5a转化效率最高，适用于常规克隆。
6 |+ N  L6 V) c* L6 j2 M# DTOP10转化效率低很多，不怎么好用。
! E2 d) o8 L8 E" z; Y- ZStbl3主要用于比较大的质粒，提高其稳定性。

weiyepan

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, r  G) G# a  K  J7 y
  N0 j# _/ g) C8 h; Q) {shRNA估计也是病毒的载体吧？用Stbl3吧。你是做克隆么？引物退火连接？然后转化没有阳性是么？

weiyepan

回复 zm19900508 的帖子1 _8 {3 e* J6 m

1 R5 \4 U7 z. k# Q! AStbl3的效率大概是DH5a的1/10，做得好的话。换一批Stbl3吧，得有10^8cfu/ug以上才好做。
+ B! N) K2 j2 u. k0 o$ `要不然就是你引物没处理好，最好做个PNK再连接。

weiyepan

PNK 就是 Polynucleotide Kinase，让你先加磷酸基到引物5'端再做连接的意思。我们的确有试过做shRNA连接不做PNK转化不长的现象，尤其是引物质量不好的时候。