CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。1 r' ]6 C8 L8 M  s$ W
第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
& E0 n: d! M0 \  _0 P第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。1 ?3 Y" T' L, ~1 f4 P- H
多谢拉！
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lyj-0017

回复 各输己键 的帖子
5 v$ J- D$ s, N4 ?1 `5 u
% a+ R' X3 X9 f* ]2 b现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子
1 P% N" H9 Y- o3 b! u" H; i
; d  D4 \5 Y; t. k再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

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回复 shizaihappy 的帖子6 @  }6 v8 Y% v3 o

& w: D& `8 j+ K( Z: \  z是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子2 |: O, a* |/ s: Z/ R) ~0 y
5 V$ a1 b3 B' i: c
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。
1 v, I- v+ [! T- v% Y$ ~6 t2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？& i7 v8 a" V: u
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂
. m$ G1 C4 s2 d4 K( z7 x1 |+ j4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子4 f/ `: L, Q7 f) k

* r$ p6 K4 q8 ^- Q, F% s你说的减半使用是所用荧光抗体量减半吗？还是细胞量减半？我不是太了解具体的参数设计，但是这个图是采用lin/log双参数显示的，应该还是比较合适的

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子) J' I3 v) ^' y: `5 ]

; A' c3 q0 ~& c$ d# ^/ t这个可以试试，非常感谢

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子& R: Y9 D$ f" s1 e5 }3 H! r6 ~) }) z

0 b! G7 T6 f# \7 Q你们的图跑得很漂亮啊，死细胞和碎片都很少。
6 W$ G: @7 Z! N( J" b) {再想问一下：
7 w6 F5 D% w8 d# L! ]$ e1 H1、你们采用抽血的方式分离单个核并一直使用培养培养的CIK吗？还是机采用培养袋培养的呢？这是检测的第几天的细胞？
" r( Q( `( H) d5 A/ j& H0 q1 d2、你们买的哪个公司的抗体呢？CD56-PE买的是哪个克隆号呢？& c! U. f  w4 ?, s8 S3 j6 g
3、你们是用哪个款式的流式细胞仪做的检测呢？: I$ q4 p7 w! v& e" _3 T7 a
问题有点多哈，烦请不吝赐教~

lyj-0017

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+ \3 o2 }- R3 ^2 e( J6 a" x9 g- t# [$ m% m$ R% v
想请教一下分离外周血PBMC如何使用培养袋养CIK？培养袋体积和初始培养基量有多大？还有初始密度是多少？

lyj-0017

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$ B; P1 D3 G3 b/ l! }1 ]9 e
2 t. d1 d( a( v+ z) I0 U想请教一下你们一开始用多大瓶子养呢？贴壁处理时，加入瓶子内的单个核细胞密度是多少呢？贴壁结束后，悬浮细胞会不会产生细胞粘连呢？