CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
# k' ?! d4 k, a% K( f% g/ J第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？) V4 c" g$ f  s3 y# m+ u3 A8 T7 _! a# @
第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。3 E) D3 G/ p+ P9 \) G
多谢拉！3 B, Z- t8 s* _) `% Q! W( j

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。, q0 B- F( z; L/ f

' j: I0 Q" K+ F% l0 T1 O$ F1 YCD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

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" _/ `: C8 n; f& h% c. L4 y( b! d8 l3 w7 F. S7 q
感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

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5 i5 T. \+ _! h" D8 N5 U2 ?9 c- j9 t7 z1 a
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

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# ], R; n6 q9 h& G再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

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5 E' G/ h+ G2 {: r3 R. n& [3 M# |9 A
是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03 8 X; [7 d. [0 C; q# b8 O
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. b7 j$ y0 H: B1 g) b- N, c: c' c+ m$ [$ F% `
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

3 P# G" l: Y# M9 A% Q哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。4 ?1 V5 `% M  p9 E4 N

+ O; ?2 ~6 x5 |你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？
( {& s, p' d) ]& J! z2 x1 ?% K  Q  A, H- ~, N3 W! {& G

lyj-0017

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% n' I0 s( p( Y$ x, a; C
3 M. y/ K: y" F' E' S1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。9 `8 e  t* ]5 r
2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？
) @! c7 }5 ~  @) G' K& a' ]" X3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂4 F; A; i* X8 s
4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47
# F1 y6 ]/ y8 ^, M2 Q+ x, n* l回复 各输己键 的帖子
# l: {4 m+ D2 P1 _% w; O0 U5 A( s- G! r
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

: u$ {6 B  X) S; R1 H对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。