CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
( J4 r# A+ i& V第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
% a3 F; g. _/ h2 }3 ?第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。
+ C' f2 a* V$ c* A多谢拉！% m) A( V4 X! C- T3 N. h

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子3 z% L1 P7 W- V3 `& D

: Z: y, s( }$ c) @- e5 C是啊，我一开始测出来也不太相信这个数据，并且这个数据是培养天数较短的。
$ j. Z) l! i: j( _, s3 [; `5 N+ \另外，你说的FL2通道漏到FL1通道信号的问题也是经验之谈，我自己用软件手动分析CD56-PE单阳管的补偿时，发现CD56象限的点图发生偏移的程度不大，基本都还是维持在自己的象限内，所以说还是认为你说的CD56-PE的补偿只需微调还是正确的。

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子& n2 O- {) v  o" U1 m; C% b, H

/ B: [0 y2 b+ m/ F) |/ G& J40%也很不错了。: T& x3 V, h% Z' ?& Q, Y
我们测到的最高的有百分之七十多，后来再也没重复出来，所以我自己也对这个值存疑了。百分之三十几的比较多。

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子6 @5 a4 |- a/ k# F$ j6 g
( P9 F, k/ A. C, t8 A* Z9 s
原来如此，恍然大悟啊，非常感谢！你们CD3CD56最高的有多少？最近做了一个达到40%多的

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子1 P1 `# X( B9 D4 z* G) O

' E+ J: ]; G2 k1 v- n* F这和CD3、CD56表达强弱无关，只是FITC和PE两种染料的特性有关。FITC荧光容易“漏”到FL2通道，而PE荧光较少“漏”到FL1通道。

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子3 i( n) q0 W9 p$ x+ S. H

+ [- [' X5 F0 E3 o/ X5 B为什么只用CD3-FITC来调节补偿呢？是因为CD56弱表达，CD56-PE跑到FL1通道的荧光少吗？

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子
# c. _' w. w) H( p! B0 K- B. B0 o4 E
两种抗体都做过同型对照。
" |7 u& J! d) b% ^6 G0 S) x荧光补偿主要是用CD3-FITC单标记细胞来做，理论上应该是CD3-FITC和CD56-PE分别单标细胞来做补偿，不过一般情况下用CD3-FITC单标细胞调好补偿后，CD56-PE只需要微调一下，甚至不调，补偿也基本是好的。

rocfield

回复 细胞海洋 的帖子
: n" q+ o& B7 n  u  p, C  I7 \9 @$ `( H$ s* f& w
谢谢

细胞海洋

回复 lyj-0017 的帖子1 `) {- C1 u' p) `/ E- U+ I* G

% i% I1 y- Q6 Y7 G- A看33楼

细胞海洋

回复 rocfield 的帖子5 F% Y& a* U/ i, u

& b2 J/ m; o3 Z9 I你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
  H8 g# U9 C! R& |; D8 @) q  C6 @. Z, ?) f3 U+ |) M9 i  }+ d, R1 }
否则他会看不到