CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

rocfield

两种抗体都做过同型对照。6 A; o) M: ]  A  r
荧光补偿主要是用CD3-FITC单标记细胞来做，理论上应该是CD3-FITC和CD56-PE分别单标细胞来做补偿，不过一般情况下用CD3-FITC单标细胞调好补偿后，CD56-PE只需要微调一下，甚至不调，补偿也基本是好的。

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子, n$ n& G& V, S

7 z' D: N) y. M  C* m' Y看了你发的CD3CD56流式检测图发现你是用的CD3-FITC和CD56-PE两种荧光抗体，那么你们是如何调节补偿的呢？是直接用CD3-FITC单阳和CD56-PE单阳进行补偿调节吗？两种抗体都做过同型对照吗？

lyj-0017

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) d( p; M9 O" I4 v
+ N( i+ r5 b6 ]1 D# v6 k& q没有拍照片，所以还是想问一下啊，你在将单个核细胞加入75cm2培养瓶时，单个核细胞的密度是多少才不会出现2h贴壁之后悬浮细胞粘连的情况呢？

lyj-0017

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  y) m6 e& w! p1 o1 j, g0 Y
- {# W0 a7 Y  X# M: p你说的都做了，但是结果还是很低啊？到底是什么原因呢？

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子1 w( c$ a1 }8 i( c% c6 X

. Z7 V5 {1 n  m) R; }# ?有图吗？

dudumao17

圈门的时候，选用任意门，可以去除死细胞。需要做不染的对照，和阳性对照，这样做样品的时候才好分析，是样品的情况，还是抗体的问题。

lyj-0017

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4 E; ^* T4 G  l+ C# a2 n* i* B6 j6 t! y+ k6 F
恩，非常感谢。但是，分离出的单个核细胞首次加入培养瓶中进行贴壁，贴壁完成后的悬浮细胞会不会聚集成团呢？我当时加的时候，贴壁完成出现粘连成片的细胞，这是什么原因呢？

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子3 D) s+ }5 i7 |/ I  r
6 c: Q# I% m0 o+ G( q2 B
开始用T75，起始的单个核细胞密度基本上和文献报道的差不多，可以根据你们的培养体系做适当调整，和扩增能力有关，密度太少，不容易长起来。我做的是略低于文献中的密度。长的过程中如果集落长得太大时，需要吹打一下，稍散开一些，避免集落过大后可能中间部分细胞营养不足死亡形成碎片，释出的DNA使细胞和碎片粘在一起。多观察，多试验就好了。

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子- R' b  J! f" L& ?

$ s; Z5 @9 U1 a0 m: ]4 t想请教一下你们一开始用多大瓶子养呢？贴壁处理时，加入瓶子内的单个核细胞密度是多少呢？贴壁结束后，悬浮细胞会不会产生细胞粘连呢？

rocfield

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* E# ]- I- x' c6 Q7 z7 U8 M+ r/ F# n, ?  `( E. @
看来您是行家了。! Y3 y8 }5 f2 c+ W
其它的抗体没测。公司研发产品，只关注一些指标性的东西。不会支持多花钱去满足我们的好奇心。