脐带干细胞活性

Amanda121201

现在报道的分离脐带干细胞的技术有很多，虽然都大同小异，但是我想跟大家探讨下，怎样才能提高分离培养出来的脐带干细胞的活性呢 有的时候分离可能会带入部分上皮细胞 又该如何避免呢，求指教

deshenglll

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5 L9 A8 C$ r" E' Z
% t3 h( {" r! z1 B9 z) w2 K# t, p* k' ?这主要看个人的分离手法了。技术熟练的会少或没有。不过有些杂细胞也无所谓的。杂细胞大多贴壁比较牢，难消化下来。我们用于临床的细胞一般在2-4代，所以大多不用为这方面担心。

18943340581

回复 Amanda121201 的帖子7 x7 ~: x5 A7 }- E

: s- Y* ^! U" _7 f首先，脐带的运输温度要尽量保持在4℃左右，运输时间不能超过36h。
$ b; s9 A# I* O  |其次，收获细胞时使用的胰酶浓度不能太高，我们是用0.05%的。
4 H0 ?& j: G7 J3 V5 N8 m最后，去除杂细胞可以通过传代的方式，一般到第3代的时候就很存了。

荷荷

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# b. Q4 C$ @+ i7 K. G2 Z  z/ m' J
( E$ g+ f, q: {" s) L" G要提高分离的细胞的活性，我感觉有以下几个影响因素：/ |( {0 X& p% [3 E! D  ?
1 操作者的分离熟练程度；
; @1 f3 u6 _; E' ?( j2 尽量缩短脐带在外面放置的时间；4 j' ^) b" O; ^4 u" A* V) p" ?5 s* _5 e3 Z
3 手术器械要用起来比较顺手，剪刀要尽可能的锋利；
( }* \: k9 N# O0 ?4 注意细胞的传代时间，70-80%的时候最好开始传；传代时尽量避免离心；
1 L* O8 ?. t& @$ Q2 ^: b) K5 胰酶的使用浓度，在可能的情况下降低胰酶的使用浓度1 z. U" W$ D4 d; J5 ~8 O
杂细胞的出现与操作者的熟练程度和使用的培养液有关，一般可通过传代的方法纯化，不过在分离过程中剥离干净羊膜、静脉和动脉，对避免杂细胞的出现更为重要。
8 V4 u$ z. ]- j) i6 J5 E- s

menghy

回复 Amanda121201 的帖子) W% }% [* @& A8 D3 Q$ f5 Y
' F4 c- `: }% m( Y( o
首先看你采用的分离细胞的方法，贴壁法和酶消化法得率细胞都不一致。在分离过程中，要完全的弃除两条动脉，静脉内皮也要全部弃除，不然在培养过程会出现内皮细胞。活性的话可以通过勤观察，勤换液，当细胞达到80%时即可传代，不然细胞生产密度过大，对后期细胞传代的代次有影响。

Amanda121201

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4 H3 G( C- n1 o* d$ z
+ n) O) V; D3 N: B恩 现在细胞刚有爬出来 不过还是很少  我们实验室常用的方法就是贴壁法 分离脐带 真是很辛苦的说 我会继续观察和学习的 以后还请多多指教

Amanda121201

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4 z8 r( B3 M4 J8 _& o, {
" |9 C% q. K( ?, [. W3 z谢谢回复 很受用 不过因为某些原因 这次脐带拿到之后 没有及时分离 大概过了三五天的样子放在4度冰箱里 不知道会不会也会影响之后细胞的活性 不过好在 现在已经有细胞爬出来了  不过数量很少 我会继续观察的 多谢指导

Amanda121201

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+ @/ P; v; L2 K/ |$ y
. O, m& f& f: @- i. R' Q5 r恩 我用的是贴壁法 现在细胞刚爬出来 数量还是比较少的 需要后期的观察了  实验室用的是商品化的胰酶 大概是2.5%的吧  所以用常规培养基稀释一下就可以继续使用了吧

荷荷

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* k( ~! f; T. ^  q% n
8 u  m6 j2 i& v8 w* `我们是临用前直接稀释，如直径100mm的培养皿，需要3ml胰酶，我们就加入2.4的生理盐水和0.6ml的正常胰酶，混匀。你可以自己尝试下，不同的培养基养出的细胞贴壁牢固程度不同，含血清的培养液可以1:1稀释，也可以直接使用。

18943340581

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  `4 [7 ]: i$ J" n9 P/ T- h$ A2 ~4 _' J1 O; z8 {: Z
胰酶一般是用PBS或者生理盐水稀释，我们用直径是100mm的培养皿，加2mL左右就行了。有的细胞贴壁很牢，也可以适当的加大胰酶的浓度，需要自己摸索了。