脐带干细胞活性

Amanda121201

现在报道的分离脐带干细胞的技术有很多，虽然都大同小异，但是我想跟大家探讨下，怎样才能提高分离培养出来的脐带干细胞的活性呢 有的时候分离可能会带入部分上皮细胞 又该如何避免呢，求指教

deshenglll

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! B( c3 X0 U; L9 i6 N4 Z3 H- |" E+ E* d) C8 K# X( J
这主要看个人的分离手法了。技术熟练的会少或没有。不过有些杂细胞也无所谓的。杂细胞大多贴壁比较牢，难消化下来。我们用于临床的细胞一般在2-4代，所以大多不用为这方面担心。

18943340581

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0 W: e3 u6 b( G% f; z( I( f3 `  U  g/ _7 f
首先，脐带的运输温度要尽量保持在4℃左右，运输时间不能超过36h。
6 v4 O  d& L# X9 T其次，收获细胞时使用的胰酶浓度不能太高，我们是用0.05%的。1 H  l1 E# i( {0 T, ^! @
最后，去除杂细胞可以通过传代的方式，一般到第3代的时候就很存了。

荷荷

回复 Amanda121201 的帖子9 f# N( B" B# j& `* r

2 W9 i9 P- E1 N. M$ ]& e要提高分离的细胞的活性，我感觉有以下几个影响因素：# V8 l- ~5 p% P5 k" d
1 操作者的分离熟练程度；2 O4 Q5 d  r/ r/ ~+ D$ V) u
2 尽量缩短脐带在外面放置的时间；" E2 b5 {4 c2 H7 l
3 手术器械要用起来比较顺手，剪刀要尽可能的锋利；
2 \( W2 G% C( q6 q6 [) @' Q6 y4 注意细胞的传代时间，70-80%的时候最好开始传；传代时尽量避免离心；
' K8 y' y' e! s  a5 胰酶的使用浓度，在可能的情况下降低胰酶的使用浓度
( {( |& g' I& D9 y6 g! R9 o杂细胞的出现与操作者的熟练程度和使用的培养液有关，一般可通过传代的方法纯化，不过在分离过程中剥离干净羊膜、静脉和动脉，对避免杂细胞的出现更为重要。" D1 B8 T( W0 e% D' G" q

menghy

回复 Amanda121201 的帖子4 c' l- C2 Q, n' c1 ~2 |$ z1 w

( s2 c  ~- o( j首先看你采用的分离细胞的方法，贴壁法和酶消化法得率细胞都不一致。在分离过程中，要完全的弃除两条动脉，静脉内皮也要全部弃除，不然在培养过程会出现内皮细胞。活性的话可以通过勤观察，勤换液，当细胞达到80%时即可传代，不然细胞生产密度过大，对后期细胞传代的代次有影响。

Amanda121201

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- x* P: Q1 J) ?2 j/ ]
: x, {2 Y, g. @5 Y恩 现在细胞刚有爬出来 不过还是很少  我们实验室常用的方法就是贴壁法 分离脐带 真是很辛苦的说 我会继续观察和学习的 以后还请多多指教

Amanda121201

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0 q: V; c; R& w/ D
& g# z. o) L; |0 B& H9 V8 m谢谢回复 很受用 不过因为某些原因 这次脐带拿到之后 没有及时分离 大概过了三五天的样子放在4度冰箱里 不知道会不会也会影响之后细胞的活性 不过好在 现在已经有细胞爬出来了  不过数量很少 我会继续观察的 多谢指导

Amanda121201

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( ~0 I4 T7 N* w4 w5 ]% |# g7 g' ^- o! c7 |/ Z
恩 我用的是贴壁法 现在细胞刚爬出来 数量还是比较少的 需要后期的观察了  实验室用的是商品化的胰酶 大概是2.5%的吧  所以用常规培养基稀释一下就可以继续使用了吧

荷荷

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7 l# P4 G/ z# o& Z9 V& k我们是临用前直接稀释，如直径100mm的培养皿，需要3ml胰酶，我们就加入2.4的生理盐水和0.6ml的正常胰酶，混匀。你可以自己尝试下，不同的培养基养出的细胞贴壁牢固程度不同，含血清的培养液可以1:1稀释，也可以直接使用。

18943340581

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* p: G8 d. `2 M, K6 ~* e7 J' `! H, n' p
胰酶一般是用PBS或者生理盐水稀释，我们用直径是100mm的培养皿，加2mL左右就行了。有的细胞贴壁很牢，也可以适当的加大胰酶的浓度，需要自己摸索了。