脐带干细胞活性

Amanda121201

现在报道的分离脐带干细胞的技术有很多，虽然都大同小异，但是我想跟大家探讨下，怎样才能提高分离培养出来的脐带干细胞的活性呢 有的时候分离可能会带入部分上皮细胞 又该如何避免呢，求指教

deshenglll

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5 V  t. ?7 B$ P2 d7 Q" l这主要看个人的分离手法了。技术熟练的会少或没有。不过有些杂细胞也无所谓的。杂细胞大多贴壁比较牢，难消化下来。我们用于临床的细胞一般在2-4代，所以大多不用为这方面担心。

18943340581

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# s  \( g! y9 f6 B# m: Q  f首先，脐带的运输温度要尽量保持在4℃左右，运输时间不能超过36h。0 ?, e% c) c& ^$ m8 w) K$ |' U% ~  l& D
其次，收获细胞时使用的胰酶浓度不能太高，我们是用0.05%的。
: H" Y( o% E+ @! L0 b5 u3 U最后，去除杂细胞可以通过传代的方式，一般到第3代的时候就很存了。

荷荷

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; Q8 p6 V$ k, L( |+ T
要提高分离的细胞的活性，我感觉有以下几个影响因素：
/ d: B  f+ K+ t/ a. b6 Q. }1 操作者的分离熟练程度；6 @5 E! T  b' g( p# `" v
2 尽量缩短脐带在外面放置的时间；
& {, i" f1 z: D& |& C! O: x4 d+ a, G3 手术器械要用起来比较顺手，剪刀要尽可能的锋利；: j# M  N; w& p. m
4 注意细胞的传代时间，70-80%的时候最好开始传；传代时尽量避免离心；
/ X( I/ \+ P# s" P5 q& i+ D5 胰酶的使用浓度，在可能的情况下降低胰酶的使用浓度7 I7 y! m! i$ s0 q; S+ r: \* A2 s8 c
杂细胞的出现与操作者的熟练程度和使用的培养液有关，一般可通过传代的方法纯化，不过在分离过程中剥离干净羊膜、静脉和动脉，对避免杂细胞的出现更为重要。
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menghy

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/ V1 N8 H( b" K# j- k# n首先看你采用的分离细胞的方法，贴壁法和酶消化法得率细胞都不一致。在分离过程中，要完全的弃除两条动脉，静脉内皮也要全部弃除，不然在培养过程会出现内皮细胞。活性的话可以通过勤观察，勤换液，当细胞达到80%时即可传代，不然细胞生产密度过大，对后期细胞传代的代次有影响。

Amanda121201

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) L: ?% u7 l2 |1 V% g. x
9 ~! q0 m6 X! ~6 _5 {恩 现在细胞刚有爬出来 不过还是很少  我们实验室常用的方法就是贴壁法 分离脐带 真是很辛苦的说 我会继续观察和学习的 以后还请多多指教

Amanda121201

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; L& c5 S+ z2 D! j
谢谢回复 很受用 不过因为某些原因 这次脐带拿到之后 没有及时分离 大概过了三五天的样子放在4度冰箱里 不知道会不会也会影响之后细胞的活性 不过好在 现在已经有细胞爬出来了  不过数量很少 我会继续观察的 多谢指导

Amanda121201

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" B% s, a$ L/ b" ?2 M
6 |. |/ S8 A# r0 d恩 我用的是贴壁法 现在细胞刚爬出来 数量还是比较少的 需要后期的观察了  实验室用的是商品化的胰酶 大概是2.5%的吧  所以用常规培养基稀释一下就可以继续使用了吧

荷荷

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我们是临用前直接稀释，如直径100mm的培养皿，需要3ml胰酶，我们就加入2.4的生理盐水和0.6ml的正常胰酶，混匀。你可以自己尝试下，不同的培养基养出的细胞贴壁牢固程度不同，含血清的培养液可以1:1稀释，也可以直接使用。

18943340581

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5 d/ H8 A2 p$ W
. V$ h$ U2 j. J1 A) e胰酶一般是用PBS或者生理盐水稀释，我们用直径是100mm的培养皿，加2mL左右就行了。有的细胞贴壁很牢，也可以适当的加大胰酶的浓度，需要自己摸索了。