发一个造血功能重建实验的方案，请指正！

ciweiyuan

细胞移植前的24小时，用325 cGy 半致死剂量处理8到10周大的小鼠，同时腹腔内注射CD122抗体（ 1 mg ⁄ mouse
% P3 E4 n+ W$ {; L) \+ S），把造血干细胞通过静脉注射的方式打到小鼠体内，移植6到8周后，处死小鼠进行造血功能重建的分析。

FreeCell

1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？
4 N1 g7 m% S0 x; l: f& p2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？
1 \1 P4 U  ~3 d/ R3、造血干细胞移植数量是多少？" D$ x' m# F$ D6 t
4、用什么做对照？' z" ~% w0 c) R: N$ f2 r
5、腹腔内注射CD122抗体目的是什么？
0 H. v- V7 ?3 ~  c+ v; n3 \0 j' c6、用什么指标评价移植是否成功？

ciweiyuan

1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？6 c, e9 m& g' |8 u) I
是的，这个是我没有说清楚
9 [8 S- Z1 n7 ~, o' M2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？# \4 h7 q- \  k1 A7 @' B6 t: U) j
这个是我从文献上看来的，希望有经验的伙伴们给些建议
6 Z( y& t: ~0 g9 O# e$ y2 W3、造血干细胞移植数量是多少？
- H$ {. @4 ?; s4 O5 |/ Q我想10的6次方是否够了呢
4 u- f5 _! s1 pl4、用什么做对照？3 m6 [. L5 k7 j) i" i& B. U
培养基可好
5 b" s9 F6 t7 ^2 v! o: h! Z5、腹腔内注射CD122抗体目的是什么？* s" m& [. u, x
中和抗体？文献上看来的
+ y5 y* }) `9 J- q* y: C1 c! l6、用什么指标评价移植是否成功？; S, e; R; L- h" U7 Y/ A) R# g1 s
取骨髓中的细胞上流式鉴定cd45，cd19，cd90？! q, R$ b& g0 P1 R! M
才疏学浅望大家多多帮助。

各输己键

ciweiyuan 发表于 2013-12-11 14:12 & G$ t5 Z& W$ B1 ]) G- v
1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？0 E5 Q  |2 d/ t+ X
是的，这个是我没有说清楚) [5 B4 L6 q& A* Y! j' }) O, C" ^
2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？

; {: t- G" D8 b8 k文献看的很好，几个问题值得商榷。' }6 ?, c3 |0 ~; O* ~# ?# N
1. 这个小鼠造模的干细胞来自何处？人还是小鼠？5 W! m. z- N; t+ f; ^  n
2. 24小时说来应该是相对最为规范的了，4h、6h、过夜都是常有的方法，但是不少学者认为6h这样的处理方式可能出现细胞因子风暴引起供者细胞损伤。3 O. L* l, w# X" o1 c) G
3. 10的6次方应该是很大一群了吧，做造血干细胞的单个干细胞都可以进行移植，如果按照这个标准的话，10的6次方恐怕会把老板打哭的。9 _. s0 i# d- \- T) `; J
4. CD122，干什么用？IL-2β链，清除NK么？为何不用pk136或者NKp46抗体。

ciweiyuan

请问你们常说的造血干细胞是指什么，我默默的把cd34阳性的细胞认为是干细胞了

ciweiyuan

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" B% Q+ I3 R! w" C0 z3 O$ r7 c4 Q; @, J  i! H$ N/ t: T
什么是细胞因子风暴？ 一般移植要用800-4000个造血干细胞吗，很是迷茫，望指点

crazytime

回复 ciweiyuan 的帖子. g0 `* f7 E' U8 U5 i. J* i+ D
6 ^, l5 @# R# F9 }7 d0 M4 x( [
我觉得数量应该根据体重来，对照用培养基不太好吧" ^" Z' G* }" ?( {: O- _

ciweiyuan

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7 E, @2 M& z) p9 P/ R4 T
: f( z4 [8 |. v1 h可能pbs更合适一些

goblinwang

- z( {; z) D9 f& x  l  c9 F# ]

' |, P! p9 U5 Q$ @' B对照应该是用不加因子，不加血清，不加双抗的基础培养基，比如我用的IMDM，移植的时间选择，我觉得辐照4-6小时内进行，比较好，至于腹腔注射抗体抑制免疫排斥，我没怎么注意，致死剂量照射，免疫系统基本都缺失了，不过我移植实验最后存活率只有50%多点，不知道其他细节是不是产生了影响，如果你有好点的意见和方法可以共同探讨，

ciweiyuan

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$ ~9 G1 g* _1 J% {0 B5 H, y3 I/ w- I) K. S# M4 M
存活率低是否和辐照的剂量有关？，你一般移植多少细胞量呢