发一个造血功能重建实验的方案，请指正！

ciweiyuan

细胞移植前的24小时，用325 cGy 半致死剂量处理8到10周大的小鼠，同时腹腔内注射CD122抗体（ 1 mg ⁄ mouse, L0 w& N. u5 I# T
），把造血干细胞通过静脉注射的方式打到小鼠体内，移植6到8周后，处死小鼠进行造血功能重建的分析。

FreeCell

1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？, r8 r) F$ R, D6 O- V6 F! W
2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？7 I2 s& a& L/ ?& W' z6 S- m
3、造血干细胞移植数量是多少？) U6 n/ l6 e9 r3 {0 e
4、用什么做对照？
1 l/ C5 C% G% {5、腹腔内注射CD122抗体目的是什么？' I0 R- y: \) s) O* F
6、用什么指标评价移植是否成功？

ciweiyuan

1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？) A3 [; }2 s; d  I6 |3 C
是的，这个是我没有说清楚
+ X% P( @! `0 Q" W6 F* y7 ]2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？
4 a2 F* w# B) ~- z( X这个是我从文献上看来的，希望有经验的伙伴们给些建议( |6 I# ~7 W) ^& U+ l
3、造血干细胞移植数量是多少？
. a. T, l  y! V& h我想10的6次方是否够了呢
" z7 a1 O, x- P/ g4 Dl4、用什么做对照？5 v' A: }* X; Y# Z  b
培养基可好
6 W6 |! Z* {6 R& |4 N( y5、腹腔内注射CD122抗体目的是什么？, j/ q: Q1 u# D6 m9 i! T
中和抗体？文献上看来的
! \) k3 V9 W' |- U: d6、用什么指标评价移植是否成功？0 x  D% }' \" l' ]* K
取骨髓中的细胞上流式鉴定cd45，cd19，cd90？
1 w( I5 j- G( s! |9 k' D7 I) R3 h才疏学浅望大家多多帮助。

各输己键

ciweiyuan 发表于 2013-12-11 14:12 . M6 N% Q" |! \
1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？
) e8 g0 r! `5 K是的，这个是我没有说清楚+ O( `0 p. x$ O/ [& ]- h0 h) N9 G
2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？

/ a- S& W; U- s+ p文献看的很好，几个问题值得商榷。
# F. `7 X- G+ u7 I2 k1. 这个小鼠造模的干细胞来自何处？人还是小鼠？
1 [7 B" A+ W6 }+ ~! e4 v2. 24小时说来应该是相对最为规范的了，4h、6h、过夜都是常有的方法，但是不少学者认为6h这样的处理方式可能出现细胞因子风暴引起供者细胞损伤。
% J4 u! A5 }/ c) t4 B: u3. 10的6次方应该是很大一群了吧，做造血干细胞的单个干细胞都可以进行移植，如果按照这个标准的话，10的6次方恐怕会把老板打哭的。
; ?- j+ M$ M5 w1 x- h4. CD122，干什么用？IL-2β链，清除NK么？为何不用pk136或者NKp46抗体。

ciweiyuan

请问你们常说的造血干细胞是指什么，我默默的把cd34阳性的细胞认为是干细胞了

ciweiyuan

回复 各输己键 的帖子
1 ?1 g8 W0 u/ q, P  K( h, W! J# {7 Z4 o, n2 T5 P' N5 n/ |
什么是细胞因子风暴？ 一般移植要用800-4000个造血干细胞吗，很是迷茫，望指点

crazytime

回复 ciweiyuan 的帖子
% H  j, l: m- h+ y' w9 F3 ]+ z7 v* q0 c2 E4 l3 Q" h
我觉得数量应该根据体重来，对照用培养基不太好吧
, ]5 O: |- k/ _$ B2 C

ciweiyuan

回复 crazytime 的帖子# `+ G4 [" v9 F1 \$ \# Q

' [) H" u5 Z$ q可能pbs更合适一些

goblinwang

+ X! ^/ a9 S% F! F: Q6 o
, X8 D" u/ e$ ^; ]对照应该是用不加因子，不加血清，不加双抗的基础培养基，比如我用的IMDM，移植的时间选择，我觉得辐照4-6小时内进行，比较好，至于腹腔注射抗体抑制免疫排斥，我没怎么注意，致死剂量照射，免疫系统基本都缺失了，不过我移植实验最后存活率只有50%多点，不知道其他细节是不是产生了影响，如果你有好点的意见和方法可以共同探讨，

ciweiyuan

回复 goblinwang 的帖子7 u- S( ?5 V, l2 k7 `/ i7 E5 M
7 j! d% Y1 K# D: v) q6 b
存活率低是否和辐照的剂量有关？，你一般移植多少细胞量呢