人脐带植块培养清洗换液的问题

willow0711

回复 荷荷 的帖子3 k6 S2 R- z3 A( D+ d/ `
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恩，谢谢你

荷荷

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个人经验，剪碎的华通胶贴壁前多洗几次去除透明质酸更有利于组织块的贴壁和细胞爬出；另外植块贴壁后我们也会选择全量换液，把组织块清洗几遍，这样换液两次之后，你在显微镜下观察就可以看到组织块中的细胞，一般6-8天会有细胞爬出，10天即可传代，详细信息可看我以前发的帖子。祝你好运！

单个核细胞

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' y+ V# S% `/ y% I7 G
) D6 \. P* i% J8 ]+ G从统计来看，没有添加任何细胞因子的状态下，15天左右可以长到如第3个图片（即大部分贴贴组织块周围局部细胞成致密状，第3个图片中的组织快已经脱落），可以进行传代培养。若是添加相关细胞因子，应该可以更快吧！. r5 \7 l  @! w5 H7 X

/ e( K- @/ c4 z4 e/ y/ B$ y完全培养液为90% DMEM/F12（1:1）+10% FBS，均为市售商品化培养基，可以参考Gibco或者Hyclone的官网。

luyue6453

回复 18943340581 的帖子; Q1 S" O' V% z9 R0 p. W" @
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你们是拨完先把组织块种到皿了？那么一条脐带种几个皿啊？等24h后再加培养液4ml的意思吗，还是种的时候就加了一些培养液？

luyue6453

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你这细胞形态真好，不知道你需要多久能长到第三个图片那么多细胞，第四个是传代了吧！可以推荐一下培养液吗？

mtdj1314

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3 H; p! F" j, [% h' C) U一般7天可见细胞

deshenglll

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洗个一两次就行了。换液最好全量换液。

frankhu

把华通胶剪成一平方厘米大小，均匀排列到培养载体底部，用少量的完全培养基浸润，避免组织块漂浮。放培养箱培养3个小时后，再补加培养基至刚好浸没组织块，放到培养箱中继续培养三天后全量换液（不要用平衡盐溶液清洗），首次换液要避免组织块被吹起来。一般一星期左右能看到组织块周围能看到间充质细胞爬出来。待细胞长成比较明显的区域性生长后，可以把组织块洗掉。待细胞长到80%融合后，消化传代。
7 n8 o# R4 F9 X" \1 b' ]2 M 以上是本实验室使用的脐带间充质细胞的分离方法，仅供参考。

willow0711

回复 xuyang0317 的帖子. V7 q3 E4 X9 h! H

' r! N3 H8 w0 Z/ {哦，谢谢

willow0711

回复 zhangshich 的帖子
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' a( z# V; m9 l哦，谢谢( k4 J6 k+ U$ n% I
那您做是大概多久可以爬出来?多久去组织块？大概多少天可以传代